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抑制胃酸对大鼠空肠菌群结构和组成的影响

发布时间:2019-09-21 21:07
【摘要】:目的:研究质子泵抑制剂(PPI)处理不同时间大鼠空肠细菌菌群结构和组成的改变,探讨抑制胃酸与肠道感染发生之间的潜在联系。方法:以大鼠为实验动物,对照组不给药(0 d),实验组连续腹腔注射奥美拉唑第5、9、14、21和28天,每天2次,每次10 mg/kg。研究结束次日处死动物,收集空肠内容物,提取DNA,PCR扩增16S rRNA基因V3区,行变性梯度凝胶电泳(DGGE),切胶测序确定细菌种属,并分析其相对丰度变化。结果:与正常对照比,短期PPI处理(第5和9天)菌群变化相对较小,菌群相似度分别为(74.8±3.0)%和(70.9±7.5)%,肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、化糖梭状芽胞杆菌(Clostridium saccharolyticum)和格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)相对丰度增加,共生菌罗伊乳杆菌(Lactobacillus reuteri)和柯林魏斯菌(Weissella koreensis)明显减少。随着给药时间延长,菌群变化程度加剧。第14天后,条件致病菌粪肠球菌(Enterococcus faecalis)过度增长,并取代罗伊乳杆菌成为最优势细菌。第21天致病菌难辨梭状芽胞杆菌(Clostridium difficile)在大鼠空肠出现和定植;至第28天菌群组成变化最大,与0 d比相似度仅约(56.1±16.7)%。结论:短期给予PPI处理可诱导大鼠空肠菌群改变,但变化较小。长期胃酸抑制(14 d)可导致空肠菌群失衡,致病菌丰度增加,可能为肠道细菌感染形成的关键诱因。
【图文】:

谱图,菌群,空肠,聚类分析


奨±s表示,组间差异比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA),两两比较用Bonferroni'smultiplecomparison检验。P≤0.05为差异有显著性统计学意义。2结果2.1PPI处理诱导大鼠胃液pH值应用幽门结扎法收集胃液测定pH值,结果PPI处理第5、9、14、21和28天,胃液pH分别为4.86±0.46、4.95±0.52、5.01±0.34、4.90±0.50和5.05±0.46,,均显著高于正常对照组(1.95±0.46,P<0.01)。2.2PPI处理空肠菌群结构改变应用Quantity-One软件对空肠菌群DGGE谱图进行聚类分析,发现给药后空肠菌群结构明显改变,见图1。可见两个明显的聚类簇(cluster),第0、5和9天聚在一起,第14、21和28天分布在另一簇。相似度分析显示,与0d比,PPI处理第5、9、14、21和28天分别为(74.8±3.0)%、(70.9±7.5)%、(63.3±6.8)%、(66.3±7.2)%和(56.1±16.7)%。通过PCA分析进一步确定了PPI处理对空肠菌群结构的影响,见图2。每个圆点代表单一样本菌群,任两个圆点之间的直线距离表示样本菌群组成的差异,距离越大,差异越大。我们发现,PPI处理第5和第9天样本与0d较为接近,而第14、21和28天距离则相对较远,表明随给药时间延长菌群组成差异增加,与聚类分析结果一致。图1空肠菌群DGGE谱图聚类分析Figure1ClusteringdendrogrambasedontheDGGEprofilesofthejejunalmicrobiota图2空肠菌群结构主成分分析Figure2Principalcomponentanalysisplotgeneratedfromthemolecularfingerprintingofthejejunalmicrobiota·48·肠外与肠内营养2017年1月第24卷第1期Parenteral&EnteralNutrition,Vol.24,No.1,January,2017

谱图,空肠,主成分分析,菌群


5.01±0.34、4.90±0.50和5.05±0.46,均显著高于正常对照组(1.95±0.46,P<0.01)。2.2PPI处理空肠菌群结构改变应用Quantity-One软件对空肠菌群DGGE谱图进行聚类分析,发现给药后空肠菌群结构明显改变,见图1。可见两个明显的聚类簇(cluster),第0、5和9天聚在一起,第14、21和28天分布在另一簇。相似度分析显示,与0d比,PPI处理第5、9、14、21和28天分别为(74.8±3.0)%、(70.9±7.5)%、(63.3±6.8)%、(66.3±7.2)%和(56.1±16.7)%。通过PCA分析进一步确定了PPI处理对空肠菌群结构的影响,见图2。每个圆点代表单一样本菌群,任两个圆点之间的直线距离表示样本菌群组成的差异,距离越大,差异越大。我们发现,PPI处理第5和第9天样本与0d较为接近,而第14、21和28天距离则相对较远,表明随给药时间延长菌群组成差异增加,与聚类分析结果一致。图1空肠菌群DGGE谱图聚类分析Figure1ClusteringdendrogrambasedontheDGGEprofilesofthejejunalmicrobiota图2空肠菌群结构主成分分析Figure2Principalcomponentanalysisplotgeneratedfromthemolecularfingerprintingofthejejunalmicrobiota·48·肠外与肠内营养2017年1月第24卷第1期Parenteral&EnteralNutrition,Vol.24,No.1,January,2017
【作者单位】: 南京大学医学院附属金陵医院(南京军区南京总医院)解放军普通外科研究所;
【基金】:国家重点基础研究发展计划(973计划)项目(2013CB531403)
【分类号】:R975

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