三棕榈酸甘油酯疏水分型表面对星形胶质细胞形态与功能的影响

发布时间：2019-09-29 16:40

【摘要】：目的：脑内的星形胶质细胞通过其复杂精细的星形结构与神经元密切接触,对维持中枢神经系统的功能有着重要的作用。而传统的体外培养方法使星形胶质细胞失去了它典型的多突起星形形态而呈现出扁平少突起的形态,所以构筑一个与体内相似的生长环境,是进行星形胶质细胞体外形态功能研究的基础。本实验采用具有不同分形维数和疏水程度的三棕榈酸甘油酯表面来模拟脑内的分形环境,研究其对原代星形胶质细胞形态和功能的影响。方法：本实验采用具有良好生物兼容性的三棕榈酸甘油酯(PPP)合成三组具有不同疏水角度的表面(分别是105°～115°、125°～135°、150°～160°),将原代培养的新生SD大鼠皮层星形胶质细胞接种到多聚赖氨酸(PLL)包被表面以及三组不同疏水角的PPP表面,培养1、2、3天。(1)通过MTT细胞活力测定、Hoechst/PI细胞凋亡染色、特征骨架蛋白GFAP、F-actin的免疫组化染色以及扫描电镜考察不同表面对星形胶质细胞生长和形态的影响。 (2)将出生后1天、4天、7天、14天的SD大鼠大脑皮层作为体内对照,通过特征蛋白Nestin、Vimentin、GFAP、GS的免疫印迹分析,考察150°～160°超斥水分形表面培养的星形胶质细胞是否具有更接近体内细胞的生物特征。(3)将150°～160°超斥水分形表面上培养的星形胶质细胞对与SD大鼠皮层神经元共培养,通过神经元标记蛋白β-tubulinⅢ、DCX、 NeuN的免疫化学染色,考察星形胶质细胞对神经元生长与分化的影响。同时测定星形胶质细胞分泌的NGF含量,并运用NGF中和性抗体拮抗培养基中的NGF,初步探讨分形材料表面培养的星形胶质细胞影响神经元生长分化的机制。结果： (1)与PLL包被表面上培养的星形胶质细胞相比,斥水分形PPP表面上培养的细胞数量显着减少,凋亡与坏死程度显着降低,并且呈现出一种更为立体的多突触星形状。随着时间以及疏水角度的增加,细胞的分形维数、初级突触的数量、突触上分支的数量、以及突触占整个细胞的比例也随之增加,其中1500～1600的超疏水PPP表面对细胞的影响更为显著,类似由三维材料Alvetex(?)Scaffold培养的星形胶质细胞的形态。(2)150°～160°超疏水PPP材料上培养的星形胶质细胞在Nestin、Vimentin、GFAP、GS四种特征蛋白的表达上与传统培养相比更接近于大鼠体内的表达趋势。(3)150°～160°超疏水PPP材料上培养的星形胶质细胞通过分泌更多的神经营养因子NGF,促进与其共培养的皮层神经元的增殖与分化。结论：三棕榈酸甘油酯疏水分形表面可以使原代培养的星形胶质细胞产生与体内星形胶质细胞相似的复杂形态及生物特征,也许能为星形胶质细胞的体外研究提供更为良好的条件,为了解星形胶质细胞在体内的功能特征提供了有利途径,并对细胞体外培养技术的改进也有重要意义。
【图文】：

浙江大学硕士学位论文逦实验结果逡逑ＭＴＴ还原值（图２．Ａ）和单位面积内的细胞数量（图２．Ｂ）上都显著低于ＰＬＬ组，逡逑不同疏水角度的ＰＰＰ表面之间无显著差异。从细胞调亡（图２．Ｃ）和细胞坏死（图逡逑２．Ｄ）两项指标上可以看出，ＰＰＰ表面培养的细胞的死亡情况要显著低于ＰＬＬ组，逡逑说明ＰＰＰ培养表面细胞数量的减少与细胞死亡无关。同时，根据ｔｗｏ－ｗａｙ邋ＡＮＯＶＡ逡逑检验结果，在１５０°？１６０°超疏水表面培养的星形胶质细胞死亡率要显著低于其他疏逡逑水角度的ＰＰＰ表面（；３＜０．０１）。由于普通材料表面是由ＰＬＬ包被的，为排除ＰＬＬ逡逑对结果的影响，我们同样在１５０°￣１６０°超疏水表面包被多赖（ＰＬＬ－ＰＰＰ），考察细逡逑胞在这种表面的细胞数量以及调亡坏死率。从图１中可以看出，ＰＬＬ－ＰＰＰ表面培逡逑养的细胞在各个指标都与１５０°？１６０°超疏水表面上的细胞无显著差异。由此可以判逡逑断

浙江大学硕士学位论文逦实验结果逡逑ＭＴＴ还原值（图２．Ａ）和单位面积内的细胞数量（图２．Ｂ）上都显著低于ＰＬＬ组，逡逑不同疏水角度的ＰＰＰ表面之间无显著差异。从细胞调亡（图２．Ｃ）和细胞坏死（图逡逑２．Ｄ）两项指标上可以看出，，ＰＰＰ表面培养的细胞的死亡情况要显著低于ＰＬＬ组，逡逑说明ＰＰＰ培养表面细胞数量的减少与细胞死亡无关。同时，根据ｔｗｏ－ｗａｙ邋ＡＮＯＶＡ逡逑检验结果，在１５０°？１６０°超疏水表面培养的星形胶质细胞死亡率要显著低于其他疏逡逑水角度的ＰＰＰ表面（；３＜０．０１）。由于普通材料表面是由ＰＬＬ包被的，为排除ＰＬＬ逡逑对结果的影响，我们同样在１５０°￣１６０°超疏水表面包被多赖（ＰＬＬ－ＰＰＰ），考察细逡逑胞在这种表面的细胞数量以及调亡坏死率。从图１中可以看出，ＰＬＬ－ＰＰＰ表面培逡逑养的细胞在各个指标都与１５０°？１６０°超疏水表面上的细胞无显著差异。由此可以判逡逑断
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R965


本文编号：2544037