氢化可的松联合rmIL-2、rmIL-15体外扩增小鼠NK细胞

发布时间：2019-11-19 05:28

【摘要】：目的建立氢化可的松联合rmIL-2、rmIL-15体外扩增小鼠NK细胞的方法 ,观察该培养方法对扩增后NK细胞的纯度、扩增效率及功能的影响。方法应用免疫磁珠分选法(MACS)分离得到高纯度的小鼠脾脏CD3-CD49b+NK细胞,依据添加刺激因子的不同将纯化后的NK细胞分成A组(rmIL-2)、B组(rmIL-2+rmIL-15)和C组(氢化可的松+rmIL-2+rmIL-15)进行体外培养,每3日添加新鲜培养基及细胞刺激因子。采用台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术检测CD3-CD49b+NK细胞纯度;CFSE稀释法检测NK细胞的增殖效率;MTT比色法检测NK细胞杀伤活性;流式细胞术检测NK细胞膜表面CD107a的表达。结果磁珠分选后NK细胞纯度由分选前的(8.59±1.41)%提高为分选后的(91.60±1.33)%。体外扩增培养15 d后A组扩增的NK细胞纯度降低[(75.02±3.48)%,P0.01],B组(85.87±4.79)%和C组(88.04±3.35)%与扩增前相比较无明显差异(P0.05)。扩增15 d后C组NK细胞扩增倍数为(45.06±1.64)倍,显著高于A组(5.28±0.34,P0.01)和B组(25.39±3.29,P0.05)。细胞增殖实验结果表明培养第7天和第14天各组NK细胞增殖指数(PI)分别为A组(2.26±0.81)和(3.27±1.21),B组(4.62±1.45)和(15.82±3.92),C组(6.91±1.34)和(23.66±5.42)。培养第7天和第14天NK细胞增殖指数C组B组A组(P0.05)。当效靶比为10∶1时,C组扩增后NK细胞肿瘤杀伤率为(81.27±2.32)%,显著高于A组[(37.20±7.32)%,P0.01]和B组[(69.51±6.32)%,P0.05]扩增后NK细胞。C组(49.32±4.36)%扩增后NK细胞CD107a表达水平显著高于A组[(9.37±1.82)%,P0.001]和B组[(28.46±4.21)%,P0.01)]NK细胞。结论氢化可的松联合rmIL-2+rmIL-15培养方案能够有效地体外扩增并活化小鼠NK细胞,为NK细胞的肿瘤过继免疫治疗应用于临床奠定了实验基础。
【图文】：

细胞(5×103个)按照不同比例混合均匀培养与96孔板中，置入37℃、5%CO2饱和湿度的培养箱中孵育。4h后通过MTT比色法检测NK细胞肿瘤杀伤活性。结果如图4所示，当效靶比为10∶1时，C组扩增后NK细胞肿瘤杀伤率为(81.27±2.32)%，显著高于经A组[(37.20±7.32)%，，P＜0.01]和B组[(69.51±6.32)%，P＜0.05]扩增后NK细胞(图4)。△P＜0.01,vsbeforeseparation.a)ThepurityofNKcellsexpandedingroupA;b)thepurityofNKcellsexpandedingroupB;c)thepurityofNKcellsexpandedingroupC.▲P＜0.01，茛P>0.05,vsafterseparation.图1NK细胞纯度Fig1ThepurityofNKcellsbeforeandafterseparation*P＜0.01,vsgroupA;▲P＜0.05,vsgroupB.图2不同方案体外扩增NK细胞的倍数Fig2TheamplificationofNKcellsexpandedinthreegroups·568·

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本文编号：2562942