松多酚酰化衍生物制备、结构表征及其抗癌作用研究

发布时间：2019-11-19 06:53

【摘要】：癌症是全球医学领域不断探索却难以攻克的难题。目前治疗癌症的常用药物毒副作用很大,天然抗肿瘤的多酚类物质毒副作用小且效果显著,但因分子量大,脂溶性差,机体内利用度低等因素限制了其开发利用。故对天然多酚进行结构修饰,研究衍生物抗肿瘤活性已经成为科研的热点。本文研究了松多酚强抗肿瘤活性成分,在提高其纯度的基础上,进行化学修饰,用以改善此类大分子在机体内的利用度。并系统的研究了松多酚PK-40及其衍生物CPK-40的体内外抗肿瘤活性,及其对S180荷瘤小鼠免疫系统及体内抗氧化酶系的影响。旨在为抗肿瘤天然药物的开发提供理论基础及实验支持。本研究采用超声辅助乙醇法提取红松球果鳞片活性物质,以AB-8大孔树脂为分离介质,通过响应面技术分段富集松多酚。对一级纯化物PK组分进行成分分析后,采用梯度洗脱方式进行二级分离,洗脱浓度为20%、40%及60%。抗肿瘤增殖活性研究:一级分离物采用MTT法对7种肿瘤细胞(HT-29、HeLa、A375、A549、MCF-7、SY5Y及LOVO)进行抗肿瘤增殖活性筛选,结合半数致死浓度EC50值比较筛选出药物敏感性肿瘤细胞LOVO进行后期实验研究。收集不同洗脱浓度下的二级多酚分离组分进行抗LOVO肿瘤细胞增殖活性研究,MT结果显示:40%的多酚组分(PK-40)纯度最高,对LOVO抑制活性最强,其EC50值为0.2154mg/m L。富集PK-40进行氧酰化及碳酰化衍生物的制备。PK-40酰化衍生物的制备:通过MTT法选择抗肿瘤能力最强的C-酰化反应物进行衍生条件优化,以抗LOVO增殖活性的EC50值为筛选指标,确定了PK-40:硬脂酰氯:无水氯化铝的最优摩尔比为1:1:1.5,最佳转化温度40℃及反应时间为8h的条件下合成的CPK-40抗肿瘤活性最强,并对衍生物初步运用紫外光谱法、红外光谱法进行结构分析。研究PK-40和酰化衍生物细胞水平及动物水平的毒理实验,确定了它们的安全浓度使用范围后在体内建立S180荷瘤小鼠肿瘤模型,对PK-40及CPK-40体内抗肿瘤活性进行系统研究。通过对小鼠生命延长率、抑瘤率及细胞周期等指标分析,结果看出:CPK-40高剂量组抑瘤效果最明显,抑瘤率为44.27%,显著的延长了小鼠的存活时间。流式细胞仪检测的结果显示PK-40-M剂量组和CPK-40-H剂量组凋亡峰面积显著,凋亡率分别是:33.4%,45.6%。且发现PK-40-M剂量组将肿瘤细胞阻滞在G2/M期,而CPK-40-H剂量组将肿瘤细胞阻滞在G0/G1期。免疫组化研究结果发现CPK-40能够提高小鼠肿瘤组织凋亡相关蛋白Bax、TNFα和Caspase-3活化亚基的表达率,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,从而能很好的促进肿瘤细胞的凋亡。Tunel检测的结果也证实了CPK-40高剂量组处理的肿瘤细胞凋亡率最高。对CPK-40对S180小鼠免疫系统影响的结果显示:CPK-40能有效的增加S180小免疫器官及血液系统免疫指数,并能促进ConA转化脾细胞增殖能力,且巨吞噬细胞吞噬作用也有所加强。对荷瘤小鼠各脏器及血液的抗氧化酶系检测结果发现:CPK-40能够有效升高小鼠体内的抗氧化酶系(SOD和GSH-Px)的活性和提升抗氧化物质GSH的合成能力,并能降低小鼠体内脂质过氧化产物MDA的水平,表明CPK-40的抗氧化活性与其抗癌活性之间存在内在的关联性。本研究对于揭示多酚化学修饰物抗癌途径具有一定的理论价值,对进一步开发天然低毒功效显著的抗癌剂具有现实意义。
【图文】：

-2-图 1-1 细胞周期模式图事件的发生连接使细胞得以生长和复制。在整个细胞周期运行过程中有原癌基因和抑癌基因两大类基因起着重要的作用。在给予细胞膜一系列刺激与细胞相关因

一点受到损伤，发生基因异常引起细胞增殖紊乱，过度增生引发肿瘤，P53 会通过调整表达量及时发挥作用[12]，当P53过度表达时发挥了和Rb关闭时一样的效应，会使细胞阻滞在 G1 期不能顺利进入 S 期完成细胞 DNA 复制，，这种阻滞留给了细胞修复的时间（如图 1-2）[13]。
【学位授予单位】：哈尔滨工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R943

【参考文献】

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本文编号：2562974