青蒿琥酯通过神经酰胺合酶—神经酰胺通路抑制肝纤维发生

发布时间：2017-03-19 17:12

  本文关键词：青蒿琥酯通过神经酰胺合酶—神经酰胺通路抑制肝纤维发生，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：肝纤维化表现为肝脏细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)异常大量沉积,其生成大于降解,尤其是I型胶原大量沉积,若不采取治疗措施可发展为肝硬化甚至肝癌。在肝纤维化形成的进程中,其中心环节为HSCs的增殖和激活,活化的HSCs增殖显著、胶原分泌增多,细胞外基质的沉积与其降解失去平衡,肝脏功能受到破坏。近年来随着对肝纤维化发病原因及机制研究的深入,提出肝纤维化是可逆转的。治疗肝纤维化的药物有很多种,本文选用青蒿琥酯作为工具药。目的探讨青蒿琥酯影响肝星状细胞产生神经酰胺的作用,初步揭示神经酰胺合酶-神经酰胺通路在青蒿琥酯抑制肝纤维发生中的作用。方法1、选用体外培养的人源肝星状细胞LX-2为实验对象,实验分为细胞对照组、青蒿琥酯组、油酰乙醇胺组及两药合用组,采用MTT法测定LX-2的增殖,比色法检测各组LX-2上清中乳酸脱氢酶活性,应用HPLC-FLD法对LX-2上清中神经酰胺(C2)的含量进行测定,Western Blot法检测各组中PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白的表达,酶消化法测定羟脯氨酸的含量。2、LX-2为实验对象,实验分为细胞对照组、Fumonisn B1组、青蒿琥酯组及青蒿琥酯与Fumonisn B1合用组,MTT法检测各给药组对LX-2增殖的影响,Western Blot法测定神经酰胺合酶(LASS2)的表达,HPLC-FLD法测定各给药组LX-2上清中神经酰胺(C2)的含量变化,Western Blot法检测与LX-2增殖及凋亡相关的PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白的表达,酶消化法测定羟脯氨的含量。结果1、与细胞对照组比较,青蒿琥酯各剂量均可显著抑制LX-2的增殖,差异具有统计学意义(P0.05),且抑制作用呈剂量依赖性及时间依赖性;不同浓度的青蒿琥酯作用于LX-2 24 h后,LX-2上清中LDH的活性与细胞对照组比较,无显著性差异(P0.05);青蒿琥酯可显著增加LX-2上清中神经酰胺的含量,且具有剂量依赖性,差异具有统计学意义(P0.05);青蒿琥酯能使PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白的表达增加,与细胞对照组比较,差异均具有统计学意义(P0.05)。羟脯氨酸的含量随着青蒿琥酯浓度的增加而降低(P0.05)。油酰乙醇胺可呈剂量依赖性地抑制LX-2的增殖(P0.05);油酰乙醇胺各剂量组LX-2中LDH的活性与细胞对照组比较,无显著性差异(P0.05);与细胞对照组比较,LX-2上清中神经酰胺水平显著上升(P0.05);PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白的表达随着油酰乙醇胺浓度的增大而增加,各剂量组中羟脯氨酸的水平均降低(P0.05),且两药合用药物作用均加强。2、与细胞对照组比较,Fumonisn B1 6μmol/L处理LX-2时细胞增殖显著,Fumonisn B1 6μmol/L与青蒿琥酯250μmol/L、350μmol/L、450μmol/L合用后,均可显著降低青蒿琥酯对LX-2的增殖抑制作用;与细胞对照组比较,应用Fumonisn B1后LASS2的表达下降,青蒿琥酯可显著提高LASS2的表达,Fumonisn B1能减低青蒿琥酯提高LASS2表达的作用;Fumonisn B1具有降低青蒿琥酯增加神经酰胺含量的作用;与二者合用组比较,PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白表达及羟脯氨酸水平在青蒿琥酯单用组最高,Fumonisn B1单用组最低,差异皆有统计学意义(P0.05)。结论1、青蒿琥酯和油酰乙醇胺可通过不同的途径增加LX-2中神经酰胺水平,均能增加PPAR-γ、p53、Caspase-3表达,青蒿琥酯呈剂量依赖性和时间依赖性地抑制LX-2增殖,促进LX-2凋亡,减低羟脯氨酸的产生。2、青蒿琥酯通过上调神经酰胺合酶-神经酰胺通路,提高神经酰胺的水平,进而增加PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白表达,发挥抑制肝纤维发生的作用。
【关键词】：青蒿琥酯 肝星状细胞 神经酰胺 神经酰胺合酶
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 缩略语12-13
• 前言13-16
• 研究现状、成果13-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、青蒿琥酯及油酰乙醇胺对LX-2 增殖及凋亡的影响16-40
• 1.1 对象和方法16-19
• 1.1.1 实验对象16
• 1.1.2 实验材料16-18
• 1.1.3 主要试剂配制18-19
• 1.2 实验方法19-29
• 1.2.1 LX-2 细胞培养19-20
• 1.2.2 MTT法绘制LX-2 生长曲线20
• 1.2.3 MTT法检测青蒿琥酯及油酰乙醇胺对LX-2 增殖的影响20-21
• 1.2.4 比色法测定LX-2 培养上清液中LDH的活性21-22
• 1.2.5 HPLC-FLD法测定神经酰胺的含量22-23
• 1.2.6 Western blotting测定PPAR-γ、p53、Caspase-3 蛋白的表达23-28
• 1.2.7 LX-2 细胞上清中羟脯氨酸的含量的测定28-29
• 1.2.8 统计学方法29
• 1.3 实验结果29-37
• 1.3.1 绘制LX-2 生长曲线29
• 1.3.2 Art对LX-2 增殖的影响29-31
• 1.3.3 NOE对LX-2 增殖的影响31-32
• 1.3.4 Art与NOE联合用药对LX-2 增殖的影响32-33
• 1.3.5 乳酸脱氢酶活性的检测33
• 1.3.6 LX-2 中神经酰胺含量的变化33-34
• 1.3.7 Western blotting检测PPAR-γ蛋白的表达34-35
• 1.3.8 Western blotting检测p53、Caspase-3 蛋白的表达35-36
• 1.3.9 LX-2 中羟脯氨酸的含量36-37
• 1.4 讨论37-39
• 1.4.1 药物对LX-2 的增殖抑制的影响38
• 1.4.2 药物对LX-2 神经酰胺含量的影响38
• 1.4.3 药物对LX-2 细胞PPAR-γ蛋白表达的影响38-39
• 1.4.4 药物对LX-2 细胞p53、Caspase-3 蛋白表达的影响39
• 1.5 小结39-40
• 二、神经酰胺合酶在青蒿琥酯抗肝纤维发生中的作用40-54
• 2.1 对象和实验材料40-42
• 2.1.1 实验对象40
• 2.1.2 实验材料40-42
• 2.2 实验方法42-43
• 2.2.1 MTT法测定神经酰胺合酶阻断剂对LX-2 增殖的影响42
• 2.2.2 MTT法检测神经酰胺合酶阻断剂与Art合用对LX-2 增殖的影响42
• 2.2.3 Western blotting检测LASS2蛋白的表达42-43
• 2.2.4 测定LX-2 上清中神经酰胺的含量43
• 2.2.5 Western blotting检测PPAR-γ、p53、Caspase-3 蛋白的表达43
• 2.2.6 测定LX-2 上清中羟脯氨酸的含量43
• 2.2.7 统计学方法43
• 2.3 实验结果43-50
• 2.3.1 神经酰胺合酶阻断剂对LX-2 增殖的影响43-44
• 2.3.2 神经酰胺合酶阻断剂与Art合用对LX-2 增殖的影响44
• 2.3.3 神经酰胺合酶阻断剂与Art合用对LASS2表达的影响44-45
• 2.3.4 检测LX-2 上清中神经酰胺的量45-46
• 2.3.5 Western blotting测定PPAR-γ蛋白的表达46-47
• 2.3.6 Western blotting测定p53、Caspase-3 蛋白的表达47-49
• 2.3.7 LX-2 上清中羟脯氨酸的含量49-50
• 2.4 讨论50-53
• 2.4.1 神经酰胺合酶阻断剂及Art对LX-2 细胞增殖的影响50-51
• 2.4.2 神经酰胺合酶阻断剂与Art合用对神经酰胺合酶表达的影响51
• 2.4.3 神经酰胺合酶阻断剂与Art合用对神经酰胺的影响51-52
• 2.4.4 神经酰胺合酶阻断剂与Art合用对PPAR-γ表达的影响52
• 2.4.5 神经酰胺合酶阻断剂与Art合用对p53、Caspase-3 表达的影响52
• 2.4.6 神经酰胺合酶阻断剂与Art合用对LX-2 中羟脯氨酸分泌的影响52-53
• 2.5 小结53-54
• 结论54-55
• 参考文献55-59
• 发表论文和参加科研情况说明59-60
• 综述60-72
• 综述参考文献68-72
• 致谢72

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 方步武,来丽娜,林雅军,马敏,甄山林,林秀珍,崔志清,高卫真,张才丽,娄建石;青蒿琥酯抗四氯化碳致大鼠肝纤维化的作用[J];中国药理学通报;2005年06期

2 邢伟;孔维涵;方步武;;蒿鳖养阴软坚方对免疫性肝纤维化大鼠的治疗作用[J];中草药;2010年10期

3 谌辉;贺永文;李玲;;PPARγ配体罗格列酮对血吸虫病肝纤维化小鼠血清TNF-α和IL-6的影响[J];肝脏;2007年02期

4 来丽娜;方步武;;青蒿琥酯抗牛血清白蛋白免疫性大鼠肝纤维化作用的研究[J];中药药理与临床;2006年Z1期

5 率红莉;方步武;邢伟;刘洁莹;;蒿鳖养阴软坚方对四氯化碳复合因素所致肝纤维化的预防作用[J];中国实验方剂学杂志;2013年16期

  本文关键词：青蒿琥酯通过神经酰胺合酶—神经酰胺通路抑制肝纤维发生，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：256311