吡格列酮对大鼠肾小球系膜细胞P38MAPK介导的氧化应激的影响

发布时间：2019-11-22 19:28

【摘要】：目的观察盐酸吡格列酮(Pioglitazone, PIO)对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(Mesangial Cells, MCs)P38丝裂原活化蛋白激酶(P38mitogen-activated proteinkinase, P38MAPK)及其介导的氧化应激的影响，探讨其肾保护机制，，为糖尿病肾脏病变的防治提供新思路。方法体外培养大鼠肾小球MCs，随机分为正常对照(NG)组、高糖(HG)组、P38MAPK抑制剂SB203580干预(S)组、吡格列酮低浓度(P1)组、吡格列酮高浓度(P2)组。48h后分别收集细胞及上清液。采用流式细胞术检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species, ROS)水平； Western blot测定磷酸化P38MAPK(phosphory1ated P38MAPK, p-p38)、P38MAPK、p22phox、p47phox蛋白含量；逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction, RT-RCR)检测细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate,NADPH)氧化酶亚基p22phox、p47phox mRNA表达；采用比色法检测MCs上清液中的超氧化物歧化酶(superoxide Dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)活性和丙二醛(malondialdehyde, MDA)水平。结果 1各组大鼠肾小球MCs ROS水平的比较与NG组相比，高糖刺激48h后，HG组细胞内ROS生成量增多(P0.05)。SB203580和PIO预先干预后，细胞内ROS生成量显著降低(P0.05)。 2各组大鼠肾小球MCs P38MAPK磷酸化程度的比较 HG组p-p38水平较NG组显著增高(P0.01)。与HG组比较，S组、P1组和P2组P38MAPK磷酸化水平明显降低(P0.05)。但各组间总P38MAPK表达无明显变化。 3各组大鼠肾小球MCs p22phox、p47phox蛋白表达量的比较 Western blot结果显示，NG组MCs可低水平表达p22phox、p47phox，高糖刺激48h，p22phox、p47phox蛋白表达量显著增加(P0.01)。而SB203580和PIO均可减少高糖介导的p22phox、p47phox高表达(P0.05)。 4各组大鼠肾小球MCs p22phox、p47phox mRNA的比较与NG组相比，高糖培养48h后MCs p22phox、p47phox mRNA表达上调(P0.05)。SB203580和PIO均可显著抑制高糖介导的p22phox、p47phox mRNA高表达(P0.05)。 5各组大鼠肾小球MCs上清液中SOD、CAT活性和MDA水平的比较 HG刺激后，SOD和CAT活性明显下降，MDA含量明显升高(P0.01)，经SB203580和不同浓度PIO干预，SOD和CAT活性不同程度升高，MDA含量减少(P0.05)。 6相关性分析 Pearson相关分析结果显示，大鼠肾小球MCs内p-p38水平与ROS水平、MDA含量正相关(P 0.01)，与SOD、CAT活力呈负相关(P 0.05)。此外，ROS水平与p22phox、p47phox蛋白表达水平正相关(P 0.01)。结论高糖刺激后大鼠肾小球MCs的ROS产生增多，P38MAPK磷酸化程度增加，p22phox、p47phox mRNA及蛋白表达增加，上清液中SOD活性、CAT活性下降、MDA含量显著增高；PIO可通过抑制P38MAPK活化减轻HG诱导的氧化应激水平，且呈浓度依赖性，该作用可能与其肾脏保护部分有关。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R965

【参考文献】