【摘要】：间尼索地平(m-nisoldipine)[化学名称:1,4-二氢-2,6-二甲基-4-(3-硝基苯基)-3,5-吡啶二羧酸甲酯异丁酯]是由河北医科大学药学院首次合成的一类新型二氢吡啶类药物,存在一个手性中心,可拆分为两个不同的光学对映体(R,S-m-nisoldipine)。间尼索地平与尼索地平(nisoldipine)为同分异构体,药理活性相当,但光稳定性较优,主要用于高血压和心脏病的防治。前期实验表明,间尼索地平原型药物排泄较少,主要以代谢物形式排出体外,并且目前主要研究其对映体在血液中代谢物情况,对于其在肠道菌群中代谢研究较少,故有必要对这方面展开实验,为临床研究提供依据。肝脏作为药物代谢的重要器官,是多数代谢反应的发生场所,CYP450酶是参与药物代谢反应的重要酶类,并容易被药物诱导或抑制,了解药物与CYP450酶的作用关系能够为药物作用机制研究提供理论依据。以往研究已证明外源性药物对CYP450酶的诱导主要是经核受体PXR介导的,间尼索地平在此方面的相关研究尚属空白,因此有必要对其此方面进行研究。本试验应用UPLC-Q-TOF-MS技术,采用大鼠肠道菌群液温孵体系,对间尼索地平代谢途径及其代谢产物结构进行分析,为进一步理解其作用机制提供依据和技术支持。采用RT-q PCR技术,以大鼠作为研究对象,系统分析了在不同剂量下,长期给予间尼索地平对CYP450酶五种亚型的影响。利用双荧光素酶报告基因系统,建立h PXR介导的CYP450酶的药物诱导剂体外筛选体系,考察间尼索地平对映体对CYP450酶的诱导作用机制。本研究旨在预测间尼索地平与其它药物相互作用,并指导临床合理用药。第一部分基于UPLC-Q-TOF-MS技术的大鼠肠道菌转化间尼索地平对映体的体外代谢研究目的:建立肠道菌转化研究间尼索地平对映异构体代谢产物的方法,确定代谢物的结构及转化途径。方法:将R,S-间尼索地平分别与大鼠肠道菌于体外厌氧温孵培养2 h,用正己烷-乙醚(1:1)萃取,离心后取上清液氮气吹干,复溶后进行UPLC-Q-TOF-MS分析。色谱条件:采用Poroshell 120 EC-C18色谱柱(2.1mm×100 mm,2.7μm)色谱柱,以0.05%甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速400μL·min-1,柱温40℃;质谱条件:电喷雾离子源(ESI源),负离子模式检测。比较样品和相应的菌空白、药物空白的数据,检测推断其代谢产物结构。结果:在对映体温孵液中检测到原药及其3种代谢产物:1,4-二氢-2,6-二甲基-4-(3-氨基苯基)-3,5-吡啶二羧酸异丁基甲酯、1,4-二氢-6-甲基-4-(3-硝基苯基)-3,5-吡啶二羧酸异丁基甲酯和1,4-二氢-2,6-二甲基-4-(3-硝基苯基)-3,5-吡啶二羧酸二甲酯,并推断MNS的肠道菌转化途径。结论:间尼索地平在肠道菌从中发生生物转化而形成代谢产物,对映体的代谢产物种类相同,代谢途径主要为还原和氧化反应。第二部分基于RT-q PCR技术的间尼索地平对CYP450酶活性的影响目的:研究间尼索地平对大鼠CYP450酶CYP1A2,CYP2B,CYP2C11,CYP2D,CYP3A1亚型的影响。方法:将SD大鼠随机分为对照组,间尼索地平低、中、高剂量组(2.5,5.0,12.5 mg·kg-1)。各组大鼠每天灌胃给药一次,连续灌胃15天后处死,并用RT-q PCR技术定量分析大鼠肝组织中CYP1A2,CYP2B,CYP2C11,CYP2D,CYP3A1的m RNA表达水平。结果:与对照组比较,间尼索地平能下调CYP1A2,CYP2B,CYP2D m RNA的表达,可以上调CYP2C11,CYP3A1 m RNA的表达,并且呈显剂量-效应关系,低和高剂量组m RNA的表达水平有显著性差异。结论:间尼索地平对CYP450酶各亚型m RNA水平有调节作用,提示间尼索地平可能通过影响CYP450酶对其它药物的代谢发挥作用。第三部分间尼索地平对映体对h PXR介导的CYP450酶的转录调节作用机制研究目的:建立h PXR介导的CYP450酶的药物诱导剂体外筛选体系,考察R,S-间尼索地平对CYP450酶的诱导是否由h PXR介导。方法:利用双荧光素酶报告基因系统,将包含h PXR蛋白识别和结合调控元件的CYP2B6、CYP2C9和CYP3A4启动子序列插入报告基因上游,将表达载体和报告载体共转染Hep G2细胞,分别用9.7、2.425和1.2125μg·m L-1的R,S-间尼索地平处理48 h后裂解细胞进行双荧光素酶活性检测。结果:R,S-间尼索地平实验组与0.1%DMSO溶媒对照组存在差异(P0.05)。R-间尼索地平可以通过h PXR诱导CYP2B6、CYP2C9和CYP3A4的表达。S-间尼索地平可以通过h PXR诱导CYP2B6和CYP2C9的表达,但是对CYP3A4没有影响。结论:该研究成功构建h PXR介导的CYP450酶药物诱导剂的体外筛选体系,R,S-间尼索地平通过激活h PXR介导了CYP450酶的表达上调,并表现出剂量-效应关系。
【图文】：
图 2 空白样品Ⅰ（A）、空白样品Ⅱ（B）、样品（C）的总离子流图Fig.2 Representative total ion chromatograms (TIC) of rat intestinal florasamples by UHPLC-Q-TOF/MS in (A) the blankⅠsample, (B) the blank Ⅱsample, (C) incubated sample
18图 3 R,S-间尼索地平的主要裂解途径Fig.3 The main proposed fragmentation pathways of R,S-m-nisoldipine
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R96
【参考文献】
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