衍生化GC法测定重组乙型肝炎疫苗中游离甲醛的含量

发布时间：2020-03-06 20:26

【摘要】：目的建立衍生化毛细管气相色谱法测定重组乙型肝炎疫苗[酿酒酵母或中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)]中游离甲醛含量。方法应用2,4-二硝基苯肼(2,4-dinitrophenylhydrazine,2,4-DNPH)衍生重组乙型肝炎疫苗中的游离甲醛后,环己烷萃取衍生物,HP-5毛细管色谱柱分离,电子捕获检测器测定,外标法定量。色谱条件:初始温度为150℃,保持1 min,再以20℃·min-1的速率升温至250℃,保持10 min;检测器温度为350℃,尾吹60 m L·min-1;进样口温度为300℃,分流比为50∶1;载气为N2;进样量为1μL。结果游离甲醛质量浓度在1.01~30.3 mg·L-1内,与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为A=3 968.5ρ-284.1(r=0.999 6)。低、中、高3个浓度的平均加样回收率为99.1%,RSD值为2.87%。结论衍生化毛细管气相色谱法可用于重组乙型肝炎疫苗中游离甲醛含量的质量控制。
【图文】：

母或CHO细胞)，首先按照“2.2.4”条处理样品，然后按“2.1”条色谱条件测定，，游离甲醛衍生物与相邻最近色谱峰的分离度均大于4.0，理论塔板数大于100000，主峰保留时间约为5.3min;由于在生产重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母或CHO细胞)过程中，容易引入甲醇和甲酸，在结构上3种化合物接近，故同时取甲醇溶液(10mg·L－1)和甲酸溶液(10mg·L－1)按照“2.2.4”条进行衍生化处理，结果证明甲醇和甲酸未发生衍生化反应，所以不会干扰甲醛的含量测定。可见该系统能够满足甲醛衍生物和其他杂质成分达到基线分离的要求(见图1)。A—Blank;B—Formaldehydereference;C—Sample;D—Formicacid;E—MethanolFig．1Derivatizationcapillarygaschromatogramsoffreeformaldehyde图1游离甲醛衍生化毛细管气相色谱图2.3.2衍生化反应条件优化取对照品溶液(5mg·L－1)，分别比较了不同超声时间(2、5、10min)、衍生温度(室温、40℃、60℃)和萃取剂(环己烷、正己烷)对衍生化后测定灵敏度的影响，见图2。290沈阳药科大学学报第32卷

Fig．2Investigationresultsofderivatizationconditions图2衍生条件的考察结果结果证明超声时间对灵敏度影响不大，为保证反应充分且节省时间，最终选取超声时间为5min;衍生化温度影响也不明显，为避免室温随地区和季节的不同选定衍生化反应温度为60℃;比较环己烷和正己烷2种萃取溶剂，结果表明以环己烷作为萃取剂萃取率高于正己烷14%，因此萃取剂选取环己烷，最终确定了衍生化条件为温度60℃，超声5min和环己烷。2.3.3线性关系考察精密量取甲醛对照品贮备液，用纯水逐步稀释成系列质量浓度为1.01、2.02、5.05、10.1、20.2、25.25和30.3mg·L－1的对照品浓溶液，按“2.2.4”条进行衍生化反应，以“2.1”条色谱条件进样测定，以甲醛质量浓度(ρ)为横坐标，以峰面积(A)为纵坐标，进行线性回归，得到的回归方程为:A=3968.5ρ－284.1，r=0.9996。表明游离甲醛含量在1.01～30.30mg·L－1内，与峰面积呈良好的线性关系。2.3.4加样回收率试验精密量取9份0.5mL供试品溶液(批号201109078-1)，分别置15mL离心管中，再分别加入低、中、高3个质量浓度(4、20、40mg·L－1)的甲醛对照品溶液0.5mL各3份，按“2.2.4”条衍生化后，以“2.1”条色谱条件进样测定峰面积，外标法计算回收率，并计算ＲSD值，结果见表1。Table1Theresultsofrecoveriestestofformaldehyde表1甲醛的加样回收率实验结果moriginal/μgmadded/μgmmeasured/μgＲecovery/%Averagerecovery/%ＲSD/%0.57282.0002.492495.9899.12.90.57282.0002.497296.220.57282.0002.521297.420.572810.00010.6886101.160.572810.00010.8046102.320.572810.00010.7574101.850.572820.00019.737295.820.572820.00020.335698.810.572820.00021.0568102.

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 吴孟李;范坤;聂锦凤;刘格辛;;自动静态顶空-毛细管气相色谱法测定污水中甲醛的研究[J];长春大学学报;2006年06期

2 张艺滨;吴传楠;杨慧敏;郝德;张林枝;王胜;顾饶胜;;甲醛毒性作用的研究进展[J];吉林医药学院学报;2008年04期

3 何鹏;洪小栩;李志刚;宋俐霏;梁争论;陈伟;胡忠玉;;不同比色方法测定疫苗中游离甲醛残留量的比较[J];中国生物制品学杂志;2012年06期

4 陈金元,耿毅,郑菊梅;CHO-C_(28)细胞收集液中乙型肝炎病毒表面抗原收率的研究[J];微生物学免疫学进展;2001年01期

5 都丽萍;梅丹;;免疫接种的安全性及不良事件[J];药物不良反应杂志;2010年04期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘明星;韦正友;;医学院校解剖实验室内空气中甲醛的测定及防护措施[J];蚌埠医学院学报;2010年06期

2 徐守群;;社区婴幼儿免疫接种认知情况调查[J];当代医学;2011年15期

3 郑健;;甲醛与人体健康[J];大学化学;2009年01期

4 钱疆;黄杰;卢声宇;蓝锦昌;;液相电化学方法检测食品中甲醛合次硫酸氢钠[J];福建分析测试;2008年03期

5 燕翔;王瀚;王都留;;童装甲醛污染与儿童健康[J];甘肃科技;2009年15期

6 尹艳凤;王安群;李倦生;陈小明;;吹扫捕集-气相色谱法测定空气中的甲醛含量[J];湖南工程学院学报(自然科学版);2012年03期

7 王志;;宜昌市疑似预防接种异常反应监测的知信行调查[J];公共卫生与预防医学;2013年06期

8 李建军;贾国伦;王君;梁建强;杨丽;;金银花不同种质花蕾的形态和品质成分比较分析[J];广西师范大学学报(自然科学版);2013年04期

9 宋新;王冰;丁璞;李先宽;陈婷;吴亚男;;1.8%复硝酚钠胁迫对五味子木脂素类成分含量的影响[J];北方园艺;2014年02期

10 何梦玲;何芳;熊洋;马嘉瑜;龚伟骏;严寒静;;茉莉酸甲酯对广藿香叶中百秋里醇含量的影响[J];北方园艺;2014年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 杨彬;崔树玉;王志玉;李爱萍;刘文杰;董非;孙启华;;低温甲醛蒸汽灭菌器灭菌效果观察[A];中华预防医学会消毒分会学术年会论文汇编[C];2010年

2 张稀雯;黄志军;向阳;郭慧娟;熊莉;许沛虎;;驱白巴布期片质量控制研究[A];医药导报(2013年8月第32卷增刊)[C];2013年

3 王晓飞;葛海生;于玲;柴江平;;柴辛鼻敏康胶囊初步稳定性研究[A];医药导报(2013年8月第32卷增刊)[C];2013年

4 王晓冬;田源红;张英;刘赘;马敬原;熊灿霞;;马兰草质量标准研究[A];医药导报(2013年8月第32卷增刊)[C];2013年

5 张芳;;复方氢氯噻嗪片中4-氨基-6-氯-1,3-苯二磺酰胺的检查[A];医药导报(2013年8月第32卷增刊)[C];2013年

6 刘会茹;王艳清;卢学军;;热毒宁注射液与甲硝唑和替硝唑氯化钠注射液的配伍稳定性研究[A];医药导报(2013年8月第32卷增刊)[C];2013年

7 周述香;程钢;曾玲;;1例严重骨外伤继发重症感染患者的药学服务[A];2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周论文集[C];2012年

8 顾嘉钦;朱s

本文编号：2585233