马尾藻岩藻聚糖硫酸酯对血栓及HUVEC和HMVEC的作用研究

发布时间：2020-03-19 12:28

【摘要】：本研究以亨氏马尾藻为原料采用超声辅助热水浸提的方式得到粗多糖,命名为F。采用DEAE C-52柱层析法对F分级纯化得到组分FD1、FD2、FD3;对F及FD1采用Sepharose CL-6B柱层析法纯化得到组分FS1、FS2及FS11。测定了以上各岩藻聚糖硫酸酯组分的化学组成,结果表明各组分的多糖含量、硫酸基含量、岩藻糖含量和糖醛酸含量差异较大。红外光谱分析表明各组分均有多糖特征官能团。I-KI试验和刚果红试验表明岩藻聚糖硫酸酯具有多条复杂支链结构,但仅FS2具有三股螺旋构象。采用HPLC法测定各岩藻聚糖硫酸酯组分的单糖组成及分子量,结果表明各组分几乎不含阿拉伯糖,FS2为葡聚糖,其它组分的特征单糖均为岩藻糖,各组分的分子量范围在1.06×10~5-3.14×10~5Da。采用经分离、纯化等步骤制得不同纯化程度的岩藻聚糖硫酸酯,通过作用于两种血栓形成途径来研究其抗血栓效果。即建立小鼠黑尾血栓模型,探讨各纯化组分的体内抗血栓效果;培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人肺微血管内皮细胞(HMVEC),探究各纯化组分对这两种血管内皮细胞的体外抗血栓效果。通过建立角叉菜胶诱导的小鼠黑尾血栓模型以对F、FD1和FS1进行抗血栓效果的初步评价,同时采用毛细管法测定各组小鼠的凝血时间。结果表明:造模后的24 h、48 h和72 h,F、FD1和FS1的各剂量组小鼠黑尾长度均短于同时期的模型对照组,且FD1和FS1抑制小鼠黑尾的效果均比粗多糖F显著(p0.05,p0.01),其中15 mg/kg剂量的FS1抑制黑尾的效果最佳(p0.01)。马尾藻岩藻聚糖硫酸酯各剂量组均可延长小鼠的凝血时间,效果由高到低依次为FS1FD1F。通过建立氧化型低密度脂蛋白诱导的细胞损伤模型以探究马尾藻岩藻聚糖硫酸酯对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人肺微血管内皮细胞(HMVEC)的损伤保护作用,结果表明氧化型低密度脂蛋白能极显著(p0.01)损伤两种血管内皮细胞并引起增殖率下降,而各岩藻聚糖硫酸酯组均能极显著(p0.01)保护细胞不受氧化型低密度脂蛋白的影响,使细胞的增殖率维持在正常细胞水平。试剂盒法测定了两种细胞的血栓素(TXA_2)和前列环素(PGl_2)的分泌量,结果表明马尾藻岩藻聚糖硫酸酯不能有效地调控HUVEC关于TXA_2和PGl_2的分泌,但能有效促进HMVEC对PGl_2的分泌并抑制TXA_2的分泌。
【图文】：

血栓,凝血,纤维蛋白,血小板

马尾藻岩藻聚糖硫酸酯对血栓及 HUVEC 和 HMVEC 的作用研究子的释放及相互作用，是血栓生成的主要因素。血液流变学改变表现在血液流动速度变慢、粘度变大、易形成涡流，导致血凝块不能被血流冲走从而聚集变大形成血栓，是血栓生成的重要原因[48]。血栓生成是由三大途径共同调控的[4,47-48]，如图 1-1 所示。

标准曲线,岩藻糖,标准曲线

广东海洋大学硕士学位论文多糖含量测定（苯酚硫酸法）验原理：在快速加入浓硫酸后，多糖迅速脱水生成糖醛以及糖醛衍生物生物能与苯酚生成一种橙红色络合物，并且在一定的可测浓度范围内，还原糖的含量成正比，并存在良好的线性关系，在 490nm 的波长下有值。验试剂：100μg/ml 岩藻糖标准溶液：1g 岩藻糖加水定容至 100ml，取 1 100ml，即得 100μg/ml 岩藻糖标准溶液；6%苯酚溶液：称取重蒸酚 6g容至 100ml。准曲线的制作：分别吸取 0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml 的岩藻糖标准液， 1ml，加入 1ml 6%苯酚溶液，摇匀，立即迅速加入 5ml 浓硫酸，混匀5min，冷却至室温，用移液枪分别注入到 96 孔板中，200μl/孔。以蒸馏，使用酶标仪在 490nm 的波长下测定吸光值。以岩藻糖浓度为横坐标为纵坐标绘制标准曲线，，得回归方程，如图 2-1。
【学位授予单位】：广东海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R96

【相似文献】