大鼠经口染毒邻羟基苯甲腈的毒代动力学研究

发布时间：2020-03-19 13:24

【摘要】：邻羟基苯甲腈是医药、农药、香料、液晶材料等的重要中间体。例如,邻羟基苯甲腈是心脑血管疾病治疗药物盐酸布尼诺尔合成的关键中间体。邻羟基苯甲腈属于6.1类毒性物质,具有刺激性气味,皮肤接触及吸入可能会引起严重的眼睛损伤、皮肤刺激、头痛、头晕、虚弱、崩溃、无意识,导致皮肤过敏、中枢神经系统衰弱,甚至死亡。邻羟基苯甲腈具有水溶性可造成水污染,从而造成严重的环境问题。因此,本研究开展邻羟基苯甲腈的毒代动力学研究,为其合理应用提供科学依据,本文从以下几个方面开展研究:一、大鼠中邻羟基苯甲腈的动力学基本特性研究建立了大鼠血浆中邻羟基苯甲腈浓度测定的LC-MS/MS法。血浆样品经乙腈沉淀蛋白质、高速离心后取上清液进行分析。邻羟基苯甲腈在0.050~20.0μg/mL范围内线性关系良好(r0.99);定量下限为0.050μg/mL;邻羟基苯甲腈的提取回收率稳定且大于70%。方法的选择性、精密度、准确度、基质效应、样品稳定性、残留等均符合生物样品分析的要求。大鼠分别单次经口灌胃染毒250、500和1000 mg/kg及静注染毒20mg/kg的邻羟基苯甲腈,在给药前和给药后不同时间点采血,并对血浆样品进行LC-MS/MS分析测定。通过DAS2.1.1药代动力学软件获得主要的毒代吸收动力学参数。结果表明,邻羟基苯甲腈低、中、高三个剂量组T_(max)在0.133~0.200 h之间,说明邻羟基苯甲腈吸收较快;低、中、高三个剂量组T_(1/2)分别为4.63±1.96 h、5.35±2.52 h及6.36±3.39 h,三者之间的半衰期差异无统计学意义(P0.05)。同时三个剂量的AUC_((0-t))分别为183±74.1μg/L·h、81.7±36.4μg/L·h和193±104μg/L·h,与剂量呈正相关。此外,250、500和1000 mg/kg三个剂量组的邻羟基苯甲腈绝对生物利用度分别为40.9%、43.5%和53.0%。二、大鼠中邻羟基苯甲腈的组织分布研究建立了大鼠组织中邻羟基苯甲腈浓度测定的LC-MS/MS法。组织样品经匀浆后用乙腈沉淀蛋白,高速离心后取上清液进行分析。邻羟基苯甲腈在0.050~10.0μg/mL呈良好的线性关系(r0.99);定量下限为0.050μg/mL;邻羟基苯甲腈的提取回收率稳定且大于70%;方法的选择性、精密度、准确度、基质效应、样品稳定性、残留等均符合生物样品分析要求。大鼠经口灌胃染毒1000 mg/kg邻羟基苯甲腈后,探究不同时间其在心脏、肝脏、脾脏、肾脏、小肠、甲状腺、睾丸、脂肪、皮肤组织、血浆等中的分布情况。结果显示,大鼠经口灌胃染毒1000 mg/kg邻羟基苯甲腈后,邻羟基苯甲腈在组织中分布广泛。小肠、肝脏和肾脏为三个主要的分布器官。小肠和甲状腺的邻羟基苯甲腈的含量随时间的延长,含量先上升再逐渐下降。在肝脏和肾脏中,邻羟基苯甲腈的含量随时间的延长,含量缓慢下降。在其他大部分组织中,邻羟基苯甲腈的浓度与血浆中浓度趋势一致。24 h后,9种组织的邻羟基苯甲腈浓度几乎都在定量限以上,提示可能有蓄积现象。三、大鼠中邻羟基苯甲腈的排泄研究建立了大鼠粪便、尿液和胆汁中邻羟基苯甲腈的LC-MS/MS浓度测定法。排泄样品经乙酸乙酯萃取挥干后,残余物用甲醇:水(1:1;v/v)溶解,取上清液进样分析。邻羟基苯甲腈在0.60~19.2μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系(r0.99),定量下限为0.600μg/mL,提取回收率稳定且大于70%。方法的选择性、残留、精密度、准确度、基质效应、样品稳定性等均符合生物样品分析要求。大鼠经口染毒1000 mg/kg邻羟基苯甲腈后,邻羟基苯甲腈在24 h内的胆汁累积排泄率为0.0274±0.0207%;144 h内邻羟基苯甲腈的粪便累积排泄率为1.55±1.89%;72 h内邻羟基苯甲腈的尿液累积排泄率为5.99±27.1%;结果表明大鼠单次经口染毒1000 mg/kg邻羟基苯甲腈后,仅有小部分的邻羟基苯甲腈通过胆汁排泄;在0-72内,邻羟基苯甲腈主要通过尿液进行排泄。四、邻羟基苯甲腈体外代谢试验研究研究了不同种属的肝微粒体、重组P450酶对邻羟基苯甲腈的代谢。分别配制不同种属的邻羟基苯甲腈肝微粒体体系,加入重组P450酶和NADPH溶液,置37℃水浴中,分别在孵育后0、15、30、60和90 min终止反应,采用LC-MS/MS方法测定药物浓度。结果显示体外重组人细胞色素P450酶孵育实验发现,介导邻羟基苯甲腈代谢酶是CYP2B6。五、邻羟基苯甲腈体外血浆蛋白结合率试验研究采用平衡透析法研究邻羟基苯甲腈对大鼠、Beagle犬和人血浆的体外血浆蛋白结合率。通过LC-MS/MS方法测定透析膜两侧药物浓度。结果显示,邻羟基苯甲腈与大鼠血浆蛋白的结合率为68.9~78.0%;与Beagle犬的血浆蛋白结合率为65.8~68.8%;与人的血浆蛋白结合率为72.9~77.2%。结果表明邻羟基苯甲腈与同一种属血浆蛋白结合率均具有统计学差异(P0.05);不同种属间蛋白结合率有统计学差异(P0.05)。
【图文】：

甲腈,羟基苯,静注,大鼠

33-5. 5 只大鼠静注 20 mg/kg 邻羟基苯甲腈后的平均药时力学参数.1.1 软件的非房室模型计算大鼠经口染毒邻羟基Tmax、T1/2、Cmax、AUC（0-t）、AUC（0-∞）和 AUC(t-∞毒代动力学参数显示如表 2-30~表 2-32 所示，学参数如表 2-33 所示。表 2-34 为单次灌胃和力学参数的对比。从表2-34结果可以看到，250

甲腈,羟基苯,静注,动力学参数

5只大鼠灌胃不同剂量的邻羟基苯甲腈后的平均药时曲线
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R99

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