新藤黄酸PEG化纳米脂质载体细胞药动学及药效学关系的初步研究

发布时间：2020-03-19 18:51

【摘要】：目的:抗肿瘤药物的作用部位一般分布在细胞内,一定程度上血浆药物浓度并不能完全代表药物的疗效,还需对药物在细胞内的行为进行研究。所以本课题在实验室前期研究的基础上旨通过建立细胞内新藤黄酸(GNA)药物浓度测定方法,研究新藤黄酸PEG化纳米脂质载体(P-GNA-NLC)细胞内药动参数的变化,通过细胞毒性和凋亡实验研究药物抗肿瘤作用;并通过细胞摄取机制的研究来探讨P-GNA-NLC在细胞内的动力学过程和细胞药效之间的关系。以期从细胞水平探究P-GNA-NLC的药效和药动之间的关系,为P-GNA-NLC的评价提供理论依据,为最终将新型的抗肿瘤药物GNA应用到临床提供依据,为新载体的优化提供参考。方法:本文以人肺腺癌细胞A549为细胞模型,通过建立高效液相色谱法测定细胞内GNA含量,研究P-GNA-NLC及GNA在A549细胞内的药动参数及其摄取途径,又通过MTT及流式细胞术研究GNA及P-GNA-NLC抗A549肿瘤细胞的作用。结果:(1)本文建立了简单高效灵敏的细胞内GNA含量的测定方法。(2)细胞药动学参数研究证明GNA经过PEG化纳米脂质载体(P-NLC)包裹后,可以显著的延长GNA在A549细胞中的半衰期及平均滞留时间,降低GNA的清除率。(3)本文经过MTT及细胞凋亡实验可以证明P-GNA-NLC可以很好的增强GNA的抗肿瘤作用。(4)通过摄取实验可知P-GNA-NLC通过巨胞饮、笼形及小窝转白转运进入细胞中,GNA几乎不通过笼形蛋白转运途径,GNA及P-GNA-NLC药效不同可能是因为P-GNA-NLC改变GNA的入胞途径,从而改善了其药动参数,进而影响GNA的药理效用。结论:本文从细胞水平探究P-GNA-NLC的细胞药动学和药效之间的关系。细胞药动学实验结果显示P-GNA-NLC的药动参数与GNA的药动参数相比有明显的改善。在相同给药浓度下GNA初始细胞摄取量与P-GNA-NLC的相当时,药效学实验结果显示GNA的抗A549细胞作用比P-GNA-NLC的弱。为探究药动和药效之间的关系,在A549细胞对GNA及P-GNA-NLC摄取机制实验中发现GNA及P-GNA-NLC进入细胞的方式有共同的转运方式,也有不同的方式;GNA通过主动转运进入细胞的方式主要是经过小窝蛋白和巨胞饮途径,另外GNA还可以通过被动扩散进入细胞;P-GNA-NLC主要通过主动转运的途径是小窝蛋白、笼形蛋白及巨胞饮转运途径,而不经过被动扩散。结合药动参数实验、细胞药效学实验及转运机制研究,最终得出P-GNA-NLC可能通过改变GNA进入细胞的转运途径来改变GNA在A549细胞中的药动学参数,从而改善GNA的抗A549细胞的作用。本论文初步证明细胞药效、药动行为跟药物进入细胞的形式和途径有一定的关系。本论文为进一步开发应用P-GNA-NLC提供理论依据,为新制剂的开发与研究提供参考。
【图文】：

第一章细胞内 GNA 含量分析方法的确立流速：1.0 mL/min柱温：30℃检测波长：360 nm进样量：20 μL3.4 专属性实验与结果按照“3.2”制备空白细胞基质、空白细胞基质+新藤黄酸、空白细胞基质+藤黄酸、新藤黄酸+藤黄酸甲醇溶液、空白细胞基质+新藤黄酸+藤黄酸、细胞内新藤黄酸+藤黄酸，按照“3.3”色谱条件”进样得色谱图进行比较，，结果显示细胞基质内源性物质不干扰待测样品新藤黄酸的测定和内标物藤黄酸的测定，并且峰形良好。UvA

mL、50 μg/mL、10 μg/mL、1 μg/mL、0.5 μg/mL，并分别取 10 μL 加入至空白细胞基质中，不同浓度的细胞含药裂解液；精密量取“3.1.1”藤黄酸样稀释至浓度为 20 μg/mL，按“3.1.3”方法制备不同浓度样品，按照“3.1.4”色”进样，记录峰面积。以质量浓度为横坐标（x, μg/mL）、峰面积比为纵坐进行线性回归，得回归方程 y=0.2462x+0.0114(R2=0.9994)。结果表明新藤 0.05~30 μg·mL-1的线性关系良好（t=49.61，P<0.01）结果见表 1 及图 2。表 1 细胞裂解液中 GNA 的标准曲线结果Tab.1 Results of standard curves of GNAin cell lysis (n=6)g/mL) 0.05 0.1 1 5 10 20 30 0.019 0.032 0.236 1.197 2.617 4.848 7.416
【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R96

【参考文献】

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本文编号：2590574