丹皮酚-奥扎格雷偶联物长循环脂质体的制备、表征及其药动学参数研究

发布时间：2020-03-21 22:19

【摘要】：奥扎格雷是一种血栓素A_2(TXA_2)合成酶抑制剂,可以通过抑制血小板聚集,扩张血管,有效抑制脑血栓的形成,被批准用于治疗心脑血管疾病。丹皮酚容易透过血脑屏障,可以通过抗炎和抗氧化的作用减少栓塞,从而改善血液循环。目的:为寻找更好的抗血小板聚集、治疗血栓的药物,以预防或治疗血小板聚集引起的心脑血管疾病,本课题以丹皮酚与奥扎格雷为前药设计合成丹皮酚-奥扎格雷偶联物(paeonol-ozagrel conjugate,POC),为了延长POC在体内的作用时间,制备POC的PEG化脂质体(POC-PLs)及普通脂质体(POC-NLs)。方法:(1)本课题采用药物拼合的原理将奥扎格雷与丹皮酚以酯键的方式进行拼合,设计合成了偶联物POC。通过~1H NMR、~(13)C NMR、质谱对产物进行鉴定,确定产物的化学结构,并测定POC的熔点、吸收波长、溶解度及lgP值等基本性质。(2)采用乙醇注入法制备POC-NLs及POC-PLs,并用单因素考察结合正交设计优化该脂质体的制备处方及工艺。采用超滤离心法结合HPLC法进行测定脂质体的包封率,纳米激光粒度仪测定粒径、多分散系数及电位值,透析电镜观察脂质体形态,体外释放对药物在释放介质中的释放性能包括释放度和释放曲线进行测定,MTT法对POC原料药、POC-NLs及POC-PLs的安全性进行初步判断了解。(3)建立POC体内全血的分析方法,确立了以乙腈沉淀蛋白作为全血生物样品的前处理方法,采用LC-MS/MS法测定全血生物样品中POC含量,采用尾静脉给药的方式,对POC原料药、POC-NLs和POC-PLs在大鼠体内的药动学参数进行研究。结果:(1)通过~1H NMR、~(13)C NMR、质谱对产物进行鉴定,确证了化合物POC的结构,通过实验测定POC易溶于甲醇、乙醇,微溶于乙酸乙酯,难溶于水,熔点为74-76℃,最大吸收波长为280 nm,在饱和正辛烷-磷酸盐体系中的lgP值为2.66。(2)根据单因素及正交实验确认了POC-NLs和POC-PLs两种脂质体的处方和工艺,最优处方和工艺下POC-NLs最优POC-PLs的包封率大于95%,POC-NLs的平均粒径在100 nm左右,平均Zeta电位-15 mV左右,外观圆整;POC-PLs的包封率大于95%,平均粒径在50 nm左右,平均Zeta电位-28 mV左右,稳定性较好。POC原料药在体外3 h时累积释放率达到89.50%,POC-NLs在48 h累积释放率为84.75%,而POC-PLs在48h仅达到72.28%。细胞毒性实验表明当POC浓度小于80μg·mL~(-1)时,POC原料药、POC-NLs及POC-PLs对PC12细胞无毒性作用,随着浓度升高,POC对PC12产生毒性作用,且POC-PLs的毒性作用高于POC-PLs与POC原料药。尾静脉给药后POC-PLs的t_(1"2)较POC-NLs组提高了1.99倍,较原药组提高了5.46倍。结论:综上所述,本文通过拼合原理合成了一种新的化合物POC,并通过乙醇注入法合成了POC-NLs和POC-PLs两种脂质体,对制剂的体外质量评价表明两种制剂均符合要求,体内外实验表明,POC-PLs较POC-NLs具有更加明显的缓释效果,有助于延长POC在体内的循环时间。
【图文】：

图 1-1 奥扎格雷酰氯的合成路线Fig. 1-1 Synthetic route of Ozagrel chloride加 75mL 二氯甲烷于三颈烧瓶中，将 6.84 g 的奥扎格雷置于 60 mL C溶液中并搅拌混合，加入 5 滴 N,N-二甲基甲酰胺（DMF），置于油浴中，35℃，转速 550 rpm。搅拌下滴加氯化亚砜（SOCl2）15 mL 在 CH2Cl2(3中的溶液，约半小时滴完，滴完后，外温加热至 77℃，回流 2.5 h，取反应于甲醇中用薄层色谱法点样进行成分分析。将反应液减压蒸干除去 SOCH2Cl2，残余物加 CH2Cl2(20 mL)打浆，抽滤，得淡黄色固体，收率 88.5

图 1-2 POC 的合成路线Fig. 1-2 Synthetic route of POC将 3.67 g 丹皮酚与 CH2Cl2(60 mL)、三乙胺（7.5 mL）溶液混合加入烧瓶冰浴。缓慢滴加打浆后奥扎格雷酰氯反应液，约 10 min 滴加完毕，温度调为 3继续反应 2.5 h，薄层色谱法点样进行成分分析。反应液加 200 mL 水洗，分观察到下层为浅棕色液体，，放出下层液，水相用二氯甲烷萃取 3 次，有机相水硫酸钠干燥。过滤后在 35℃下减压旋蒸反应物，得到黄棕色油状液体。棕色油状液体拌样，硅胶干法装柱，乙酸乙酯作为洗脱液洗脱得到淡黄色固产率为 27.2%。2.2 结构的表征2.2.1 质谱
【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R943;R96

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本文编号：2594018