一种新型肽对Lewis肺肿瘤细胞抑制作用的体外研究
本文关键词：一种新型肽对Lewis肺肿瘤细胞抑制作用的体外研究，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：肺癌作为恶性肿瘤之一,已对人类的健康构成了严重的威胁。近年来,由于快速发展的工业化建设而导致的环境污染的加重、越来越多的人们吸烟等因素,使我国的肺癌发病率呈逐年递增的趋势,并且其致死率已位于我国肿瘤致死率之首。肺癌在患者发病早期时不易被察觉,去临床就诊时,病情往往已发展到中晚期,与最佳的治疗时机失之交臂。目前临床上的治疗手段仍以传统治疗方法为主,如手术、放疗和化疗,这些传统治疗方法虽然能使临床疗效提高,延长了患者的生存期,但是它们的毒副作用很大,这也是这些治疗方法面临的严峻问题。迄今为止,国内外研制的抗肿瘤药物众多,但是多数药物有不良反应多、耐药性以及价格昂贵等特点。为此,寻找高效、低毒、价廉,且能有效提高疗效的药物治疗肺肿瘤仍是临床亟需解决的问题。近年来研究表明,多肽类药物具有抗肿瘤的功效,与其它药物相比,多肽类药物由于具有分子量小、与其他物质结合而成的化合物稳定性高、不易被蛋白酶水解以及制作成本低等优点,其在治疗肿瘤方面已有着比较明显的优势。目的:研究新型肽对Lewis肺肿瘤细胞增殖、侵袭和凋亡作用的影响。方法:采用MTT法观察不同时间点(24h48h及72h)新型肽对Lewis肺肿瘤细胞的增殖抑制作用;Transwell小室法检测细胞侵袭能力;采用吖啶橙/溴化乙锭法、线粒体膜电位法检测Lewis肺肿瘤细胞在48h细胞凋亡情况,荧光显微镜下观察细胞凋亡的情况及细胞线粒体膜电位的变化;流式细胞仪检测新型肽对Lewis肺肿瘤细胞的细胞周期细胞凋亡的影响;用Western Blot法检测Cyclin-D1、Pro-caspase3蛋白表达水平。结果:研究显示,新型肽对Lewis细胞在不同时间点具有一定抑制增殖的作用,并在48h作用最为明显;在Transwell侵袭小室实验中,穿膜细胞数呈下降趋势,表明细胞侵袭能力减弱;用荧光显微镜观察细胞凋亡情况,治疗组细胞的线粒体膜电位显著降低,表明细胞发生凋亡;用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况,G0/G1期细胞数显著增加,S期细胞数减少,晚期细胞凋亡率明显增加;Western Blot检测结果表明,随着新型肽浓度的增加,Cyclin-D1蛋白、Pro-caspase3蛋白的表达水平均逐渐降低。结论:新型肽能明显抑制Lewis肺肿瘤细胞的增殖和侵袭能力,阻碍细胞周期的进展,其作用机制可能与Cyclin-D1蛋白、Pro-caspase3蛋白表达降低有关,引起细胞凋亡。
【关键词】：新型肽 Lewis肺肿瘤细胞 细胞凋亡 蛋白表达
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：
- 摘要4-6
- Abstract6-9
- 英文缩写词表9-14
- 第1章 绪论14-21
- 1.1 肺癌14-15
- 1.1.1 小细胞肺癌(SCLC)14-15
- 1.1.2 非小细胞肺癌（NSCLC）15
- 1.2 治疗肺癌的手段15-17
- 1.2.1 手术治疗16
- 1.2.2 放疗与化疗16-17
- 1.2.3 分子靶向治疗17
- 1.2.4 生物治疗17
- 1.3 多肽17-18
- 1.3.1 二肽化合物18
- 1.3.2 三肽化合物18
- 1.3.3 四肽化合物18
- 1.4 多肽的筛选18-19
- 1.5 多肽抗肿瘤的机制19-20
- 1.5.1 诱导细胞凋亡19
- 1.5.2 直接作用于肿瘤细胞膜19
- 1.5.3 抑制肿瘤新生血管生成19-20
- 1.6 多肽类药物治疗肿瘤的优点20
- 1.7 本实验设计路线20-21
- 第2章 材料和方法21-30
- 2.1 材料21-22
- 2.1.1 细胞、药品21
- 2.1.2 实验试剂、耗材21-22
- 2.1.3 主要仪器22
- 2.2 溶液的配置22-26
- 2.2.1 新型肽溶液的配置22
- 2.2.2 阳性对照药博来霉素溶液的配置22-23
- 2.2.3 主要试剂的配置23-26
- 2.3 方法26-29
- 2.3.1 MTT法检测细胞增殖26
- 2.3.2 Transwell侵袭小室实验26-27
- 2.3.3 AO/EB双染细胞爬片27
- 2.3.4 JC-1 染色检测线粒体膜电位27-28
- 2.3.5 流式细胞仪检测细胞周期28
- 2.3.6 流式细胞仪检测细胞凋亡—AnnexinV-FITC法28-29
- 2.3.7 Western Blot检测Cyclin-D1、Pro-caspase3的表达29
- 2.4 统计学方法29-30
- 第3章 结果30-43
- 3.1 新型肽对Lewis肿瘤细胞增殖作用的影响30-32
- 3.2 新型肽对Lewis肺肿瘤细胞侵袭能力的影响32-34
- 3.3 AO/EB双染法检测细胞凋亡34-35
- 3.4 新型肽对Lewis肿瘤细胞线粒体膜电位的影响35-37
- 3.5 新型肽对Lewis肿瘤细胞周期分布的影响37-38
- 3.6 用Annexin V-FITC法检测新型肽对Lewis肿瘤细胞凋亡作用的影响38-40
- 3.7 Western Blot检测新型肽对Lewis肿瘤细胞Cyclin-D1、Pro-caspase3蛋白表达的影响40-43
- 第4章 讨论43-48
- 第5章 结论48-49
- 参考文献49-57
- 作者简介及科研成果57-58
- 致谢58
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