BrMC和索拉非尼合用对SMMC-7721肝癌干样细胞特性的影响

发布时间：2017-03-21 19:13

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【摘要】：目的:研究8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxychrysin,Br MC)和索拉非尼(sorafenib,SO)合用对SMMC-7721细胞系肝癌干样细胞(liver cancer stem-like cells,LCSLCs)特性的影响,并探讨Br MC和SO及两者合用对LCSLCs特性的作用是否涉及调节HIF-α、Twist和NF-κB蛋白表达。方法:用超低粘附培养板,干细胞条件培养基悬浮培养和扩增肝癌SMMC-7721细胞系球形成细胞(sphere forming cells,SFCs)。在亲本细胞、SFCs或Br MC(5μmol/L)和SO(5、15、45μmol/L)及两者合用处理的SFCs,肿瘤球形成法测定自我更新能力,Western blot分析CD133、CD44、ALDH1、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达,划痕法和Transwell侵袭试验分别检测体外细胞迁移和侵袭能力,细胞凋亡检测试剂盒测定细胞凋亡率,检定LCSLCs特性和评估合并用药效应;Western blot分析HIF-1α、Twist1和NF-κB蛋白表达,探讨联合用药作用机制。结果:干细胞培养基超低粘附板悬浮培养5天,从人肝细胞癌SMMC-7721细胞系得到的SFCs具有LCSLCs特性,即:更高肿瘤球形成率(P≤0.05)和干细胞标志物CD133、CD44、ALDH1蛋白表达(P≤0.05),更强的体外细胞侵袭与迁移能力(P≤0.05),下调E-cadherin蛋白的表达(P≤0.05),同时上调N-cadherin表达(P≤0.05),自发性凋亡率低。Br MC(5μmol/L)分别与SO(5.0、15.0和45.0μmol/L)合用具有协同抑制LCSLCs自我更新能力(P≤0.05),降低干细胞标志物CD133、CD44、ALDH1蛋白表达水平(P≤0.05),抑制细胞迁移与侵袭(P≤0.05),下调N-cadherin蛋白表达(P≤0.05)和上调E-cadherin表达(P≤0.05)以及促进细胞凋亡作用(P≤0.05)。Western blot分析发现Br MC与SO协作下调LCSLCs HIF-α、Twist1蛋白表达(P≤0.05)和拮抗SO上调LCSLCs NF-κB(p65)蛋白表达效应(P≤0.05)。结论:1.人肝细胞癌SMMC-7721细胞系SFCs具有LCSLCs特性。2.BrMC与SO协同抑制LCSLCs特性。3.Br MC增强SO抑制LCSLCs特性作用涉及其协作SO下调HIF-α、Twist1蛋白表达和拮抗SO上调LCSLCs NF-κB(p65)蛋白表达。
【关键词】：肝癌 肝癌干细胞样细胞 8-溴-7-甲氧基白杨素 索拉非尼 增敏作用
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 1．前言10-13
• 2．材料和方法13-20
• 2.1 实验材料13-16
• 2.2 实验方法16-20
• 3．结果20-44
• 3.1 人肝癌SMMC-7721细胞系肝癌干样细胞的培养、扩增和特性检定20-28
• 3.2 索拉非尼及与BrMC两者合用对肝癌干样细胞特性的影响28-39
• 3.3 索拉非尼及与BrMC两者合用对肝癌干细胞样细胞HIF-α、Twist1和NF-κB蛋白表达的影响39-44
• 4．讨论44-49
• 5．结论49-50
• 参考文献50-58
• 附录 1：英文缩略词索引58-59
• 附录 2：综述59-68
• 参考文献64-68
• 攻读硕士学位期间的主要成果68-69
• 致谢69

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本文编号：260171