鼠李糖乳杆菌菌剂的制备及其对小鼠肠道菌群影响的研究

发布时间：2020-04-01 17:26

【摘要】：益生菌具有良好的功能特性,有益于人类免疫和健康。一般规定益生菌产品菌数量超过10~6(CFU/g)能达到较好的效果。但是,益生菌要经历胃液及肠液的破坏作用,加上储存过程中环境因素的破坏,导致益生菌活性大大降低。因此,必须采取手段提高益生菌活性。本研究采用微胶囊挤出法与真空冷冻干燥技术相结合的方法,对一株由本实验室保存的鼠李糖乳杆菌进行包埋,优化了工艺条件,进行了性能研究,最后研究了微胶囊对小鼠肠道菌群的影响。主要研究内容和结果如下:(1)通过体外评价实验,对鼠李糖乳杆菌L427的肠道特性进行了研究。结果表明菌株增殖迅速,2 h即进入对数生长期。对pH 2.0的酸度几乎不耐受;对0.3%胆盐浓度能勉强耐受,经胃肠液处理后菌活性大大降低,需要对该菌株进行保护提高菌活性。(2)通过单因素实验,研究了菌液-壁材体积比、海藻酸钠浓度、刺云实胶浓度以及氯化钙浓度对鼠李糖乳杆菌肠溶性微胶囊形成的影响,并进行正交实验,确定了挤出法制备微胶囊最佳包埋工艺条件为海藻酸钠浓度2%,刺云实胶浓度0.5%,氯化钙浓度0.3 mol/L,菌液-壁材体积比1:6;在此条件下制备的微胶囊的活菌数和包埋产率分别为4×10~8CFU/g和94.51%。微胶囊经模拟胃液和模拟肠液处理后,结果表明制备的微胶囊具有良好的胃液耐受性和肠道释放性。(3)通过单因素实验,研究了保护剂对鼠李糖乳杆菌微胶囊冷冻干燥的影响。选取甘露醇和海藻糖进行正交试验,确定复合保护剂的最佳配方:甘露醇浓度3.5%,海藻糖浓度4%,在此条件下制备的冻干微胶囊中菌株的最大存活率为82.92%。冻干微胶囊经模拟胃液和模拟肠液处理后,结果表明冻干微胶囊具有良好的胃液耐受性和肠溶性,且保护剂的添加能提高胃液耐受性和肠溶性。含水量实验和保质期实验结果表明,鼠李糖乳杆菌冻干微胶囊在储存期间能维持较好的活性。(4)将小鼠分为对照组、空胶囊组、鼠李糖乳杆菌菌液组以及鼠李糖乳杆菌微胶囊组分别饲喂16天,然后恢复正常饮食继续饲喂8天。每隔4天取一次粪便,通过高通量测序法分析几组处理对小鼠肠道菌群的影响。结果表明鼠李糖乳杆菌菌液或者微囊化鼠李糖乳杆菌能提高小鼠肠道菌群结构的丰富度与多样性;调节肠道主要菌种分布,在门水平上,使变形杆菌门减少,拟杆菌门增多、厚壁菌减少,在科水平上使一些致病菌减少,如黄单胞菌科和巴斯德菌科等;因此分析鼠李糖乳杆菌通过使致病菌数量减少,来达到益生效果。
【图文】：

鼠李糖乳杆菌,菌株,滞后期,生长曲线

图 1-1 鼠李糖乳杆菌 L427 生长曲线的测定图 1-1 可知，在菌株生长中几乎没有观察到滞后期，并且在培养 2 小期，表明菌株生长迅速。在 2-6 h 期间，菌株生长速度几乎呈直线菌株生长速度降低，但是，它仍然以一定的速率生长，表明菌株在期。12 h 后 OD600 nm略微下降，但不明显，表明菌株进入稳定期。益，，对数生长期中后期和稳定期的菌液是其最佳选择[61]。由结果可见液的最佳时间段可选在 9-14 h，该时间段处于对数期后期和稳定期前要求且菌株仍有一定生长活性且生长相对稳定。标准曲线测定过进一步绘制标准曲线，建立 OD600 nm与活菌数间的线性关系（如益生菌剂时能更方便快速地计算活菌数。图1-2可知，得到线性回归方程y=0.6885x+8.5786，R2=0.9997（x为O的对数）。线性系数r非常接近1，表明标准曲线具有良好的线性关系

鼠李糖乳杆菌,MRS培养基,菌株,酸度

株对 pH 2.0 的酸度几乎不耐受；在 pH 3.0 的 MRS 培养基中有菌体生长，表明该菌株对pH 3.0 的酸度能部分耐受；在 pH 4.0 的 MRS 培养基中，鼠李糖乳杆菌菌株 L427 能较图1-3 鼠李糖乳杆菌L427在不同pH条件下的生长状况
【学位授予单位】：聊城大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R96;TS201.3

【参考文献】