叶酸介导阿霉素白蛋白纳米粒的制备及细胞学研究

发布时间：2020-04-10 00:41

【摘要】：盐酸阿霉素(Doxorubicin,DOX)又称多柔比星,属于蒽环类广谱抗肿瘤药物。最初由松链丝菌浅灰色变株(Str.Peucetius var.Caesius)的培养液提取得到。其化学结构与柔红霉素相似,可由柔红霉素通过化学方法转化制得。目前亦可通过化学全合成得到。DOX对肝癌、甲状腺癌、淋巴癌、肺癌具有很好的疗效,对膀胱癌、支气管癌也有一定的治疗作用。但其对机体可产生广泛的细胞毒性,静脉注射高剂量的DOX将会引起严重的心脏及脊髓毒副作用,这些缺点成为限制DOX在临床应用的主要因素~([1])。本文采用制剂学方法来提高盐酸阿霉素的疗效、减少其毒副作用,研究其肿瘤活性靶点及体外药效学特点。由于在特定肿瘤细胞中,叶酸受体会过度表达,本文选择主动靶向制剂靶头是能够与叶酸受体有特异性亲和作用的叶酸。采用化学修饰法将叶酸偶联到阿霉素白蛋白纳米粒上,以期实现制剂在主动靶向肿瘤部位蓄积、释放模型阿霉素进而杀伤肿瘤细胞的目的。实验过程中采用去溶剂化法制备白蛋白纳米粒,并对制剂的处方和制备工艺进行优化。将粒径、粒度作为考察指标进行评估,采用星点设计-响应面法对盐酸阿霉素纳米粒的制备工艺进行优化,确定优化处方如下:白蛋白的质量浓度为20g.L~(-1),盐酸阿霉素浓度为1g.L~(-1),pH为9,白蛋白理论交联度为115%。再利用叶酸活性酯与白蛋白表面上的活性氨基反应,得到叶酸介导的、具有一定主动靶向抗肿瘤作用的阿霉素白蛋白纳米粒,对其药剂学性质进行考察。以市售的阿霉素冻干粉末剂为对照,采用MTT法,考察了叶酸介导阿霉素白蛋白纳米粒对人肝癌细胞HEPG2和人胃癌细胞SGC7901的体外抗肿瘤活性。结果表明,制备出的叶酸介导阿霉素白蛋白纳米粒,其粒径大小平均为(277.43±0.67)nm,90%的粒径小于289.00nm,粒度分布较为均匀。包封率为(70.43±0.67)%,载药量为(19.33±0.32)%。体外释放实验表明,叶酸介导阿霉素白蛋白纳米粒具有缓释性质,24h内药物释放率约为26.7%,体外药效学结果显示,叶酸介导阿霉素白蛋白纳米粒和DOX水溶液对高表达的人肝癌细胞HEPG2细胞的IC_(50)值分别为4.98μmol/L和5.13μmol/L,对人胃癌细胞SGC7901的IC_(50)值分别为4.85μmol/L和5.02μmol/L。以生物可降解的白蛋白为载体、偶联叶酸配体后制备叶酸介导高载药量的阿霉素白蛋白纳米粒,其在体外对HEPG2细胞和SGC7901细胞均具有杀伤作用。与盐酸阿霉素冻干粉末剂相比,显示出较强的抑制效果。
【图文】：

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化工大学硕士学位论文第二章盐酸阿霉素白蛋白纳米粒的处方及制上下两层。上层为无色透明的液体，下层为白色沉淀。倾除上清液，将色沉淀加水稀释至原体积，放于超声波清洗机中，超声震荡 10min，使均匀分散开；（6）将上述溶液重复洗涤 3 次后，用注射器吸取溶液，过 0.2um 微将滤液再次离心，倾去上清液，离心管中剩余的滤渣即我们需要的纳渣晾干即可得到白蛋白纳米粒粉末固体。其表征状态如图所示，可以白纳米粒呈现乳白色，粒度均匀细腻，试验成功。

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约需滴加3.5ml。可以看到溶液由紫红色透明状态变为淡红色乳状液体溶剂化过程，盐酸阿霉素白蛋白纳米粒即在此期间形成。5.固化剂的加入用移液枪量取质量分数为8%的戊二醛溶液20ul ，沿着反应瓶壁加入反使纳米粒交联固化，为使固化效果更好，将反应瓶继续放在25℃的恒温器中搅拌 12~24 小时。6.离心搅拌结束之后，取两支相同的离心管，，将反应瓶中的液体均匀倾倒在两中，在电子天平上，用蒸馏水配平二者的质量。然后对称放置在离心离心机的转速为1.5×104r/min。高速离心10min，溶液分为上下两层，倾，将沉淀物加水至原体积，超声震荡。7.纳米粒的制取将上述所得溶液过0.2um微孔滤膜，然后将滤液再离心，倾去上清液，得到盐酸阿霉素白蛋白纳米粒粉末。如图所示（粉红色）：
【学位授予单位】：沈阳化工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R943

【参考文献】