硫酸铵梯度法制备姜黄素脂质体Cur-PEG-LPs及其抗肿瘤效果的评价

发布时间：2020-04-20 18:04

【摘要】：姜黄素(Curcumin,Cur)是一种从姜科植物姜黄中提取的多酚类有效成分。因其具有抗炎症、抗肿瘤、抗阿尔兹海默症、抗病毒、抗菌等多种药理作用,而被广泛关注。但由于其在水中的溶解度差,仅溶于乙醇、氯仿、冰醋酸等有机溶剂,使得Cur难以进一步在临床中进行推广使用。硫酸铵梯度法可以将弱碱性药物载入脂质体,从而得到高载药量的脂质体。本课题使用硫酸铵梯度法制备了姜黄素脂质体(Cur-PEG-LPs)提高了载药量,并提高了细胞摄取的效率,增强了体外抗肿瘤效果,改善了药动学行为,但不能抑制4T1肿瘤在Balb/c小鼠体内的生长,体内分布实验显示Cur和Cur-PEG-LPs主要蓄积于肺部。目的:姜黄素(Cur)聚乙二醇化脂质体(PEG-LPs)通过硫酸铵梯度法制备,以提高载药量。研究了Cur-PEG-LPs在体外和体内的抗肿瘤效果。方法:采用挤出技术制备空白脂质体,采用后插法完成脂质体的PEG化。通过硫酸铵梯度法,使用乙酸作为共溶剂将姜黄素载入PEG-LPs中,并通过葡聚糖凝胶Sephadex G-50柱分离游离姜黄素。然后通过动态光散射(DLS),差示扫描量热仪(DSC)和X射线衍射(XRD)进行表征;使用荧光显微镜和细胞流式技术检测Cur-PEG-LPs被细胞摄取的情况,MTT法检测体外细胞毒性;静脉注射后,对大鼠体内血药浓度进行了测定并计算了药代动力学参数;成功建立4T1荷瘤小鼠模型,用于药效学实验;通过HPLC测定姜黄素在主要器官和肿瘤中的生物分布。结果:成功地制备了姜黄素脂质体(Cur-PEG-LPs),包封率(EE)为45.8%,载药量(DL)为5.6%。Cur-PEG-LPs的平均粒径为203.3±16.1nm,多分散系数(PDI)为0.269±0.018。Cur-PEG-LPs在荧光观察中相较于Cur有更强的荧光强度,Cur-PEG-LPs细胞流式所检测到平均荧光强度与Cur组相比有显著的差异,Cur-PEG-LPs促进了Cur的细胞摄取。在MTT试验中,24小时的IC_(50)从28.15μg/mL降至16.99μg/mL,这表明抗肿瘤能力的增强。Cur-PEG-LPs还改善了姜黄素在大鼠中的药代动力学行为,将半衰期从Cur的135.94±43.32 min,延长至Cur-PEG-LPs的527.48±32.73 min,相比于Cur提高了3.5倍,也提高了提高生物利用度。在行静脉注射10mg/kg的剂量后,Cur和Cur-PEG-LPs均不能抑制荷瘤小鼠上的4T1肿瘤生长。生物分布测定显示Cur和Cur-PEG-LPs均在肺中有大量累积。结论:硫酸铵梯度法可成功地将姜黄素载入脂质体中,使载药量提高2倍。Cur-PEG-LPs能有效的促进细胞摄取,同时提高生物利用度。但对Balb/c小鼠体内的4T1肿瘤没有抑制作用。Cur和Cur-PEG-LPs在肺中蓄积的现象可以作为一种给药策略进一步研究开发。
【图文】：

图 1 Cur 甲醇溶液的标准曲线Figure 1 Standard curve of Cur in methyl alcoholG-LPs 的包封率和载药量显示，使用梯度法构建的姜黄素脂质体其载药量与薄膜但是包封率并没有显著改善，甚至还有所下降。膜分散法和梯度载药法包封率（EE）和载药量（DL）(mean ± Sapsulation efficiency (EE) and drug loading capacity (DL) of thin-firemote-loading method (mean ± S.D., n = 3).法 EE D散法 49.5 ± 2.6% 2.3 ± 0

0 10 20 30 4时间 (h)CurCur-PEG图 4 Cur 和 Cur-PEG-LPs 的体外溶出曲线ure 4 Dissolution profiles of Cur and Cur-PEGPEG-LPs 的冻干品r-PEG-LPs 冻干后如图 4 所示，PEG-L松饼状，，略有坍塌。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R943;R96

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本文编号：2634806