锝亚甲基二膦酸盐对RAW264.7及MC3T3-E1细胞影响的研究

发布时间：2020-04-24 02:14

【摘要】：[目的]研究锝亚甲基二膦酸盐(99Tc-MDP)对RAW264.7及MC3T3-E1细胞的影响,为临床治疗颌骨成釉细胞瘤等破骨细胞引起的相关性骨吸收疾病提供理论依据。[方法]采用不同浓度的99Tc-MDP作用于小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)及小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1),通过CCK-8检测细胞增殖抑制率,流式细胞技术检测细胞凋亡及细胞周期,免疫细胞化学及Western blot检测RANKL、OPG和RANK蛋白的表达情况。[结果]0.01 μg/ml 和100μg/ml 浓度99Tc-MDP 作用 RAW264.7 细胞 48h后,抑制率分别为6.09±2.38%和52.57±8.38%,不同浓度的99Tc-MDP对RAW264.7细胞的抑制作用明显强于对照组(P0.05),并诱导细胞凋亡,降低RANK 蛋白的表达。0.01μg/ml 和 100μg/ml 浓度99Tc-MDP 作用 MC3T3-E1 细胞48h后,存活率分别为123.08±2.87%和76.64±4.29%,与对照组比较,低浓度0.01 μg/ml 99Tc-MDP对MC3T3-E1细胞具有明显增殖作用(P0.05),促进OPG和RANKL蛋白的表达。而高浓度1000μg/m199Tc-MDP对MC3T3-E1细胞具有明显抑制作用,抑制OPG和RANKL蛋白的表达。不同浓度的唑来膦酸(ZOL)对RAW264.7细胞和MC3T3-E1细胞的抑制作用明显强于对照组(P0.05)。[结论]99Tc-MDP对RAW264.7细胞有抑制作用,随浓度和作用时间的延长而增大,诱导其凋亡和抑制RANK蛋白的表达。0.01μg/ml低浓度99Tc-MDP对MC3T3-E1细胞作用有促增殖作用,并增加OPG蛋白的表达。ZOL对RAW264.7细胞和MC3T3-E1细胞均有抑制作用,且随浓度和作用时间的延长而增强。99Tc-MDP对颌骨成釉细胞瘤开窗治疗可能具有一定的辅助治疗作用。
【图文】：

结果逡逑１．细胞生长曲线逡逑通过ＭＴＴ法检测细胞的生长曲线（图１，２），ＲＡＷ２６４．７细胞以ｌｘｌ0４个／逡逑孔、２ｘｌ0４个／孔、３ｘｌ0４个／孔、私１0４个／孔、５＞＜１0４个／孔、６ｘｌ0４个／孔、７ｘｌ0４个逡逑／孔、８ｘｌ0４个／孔的密度分别接种于９６孔板中培养２４ｈ均达到对数生长期；４８ｈ逡逑时ｌｘｌ0４个／孔、２ｘｌ0４个／孔、３ｘｌ0４个／孔、４ｘｌ0４个／孔四组仍成对数生长，其余逡逑各组趋于稳定；７２ｈ时ｌｘｌ0４个／孔、２ｘｌ0４个／孔两组仍成对数生长，３ｘｌ0４个／逡逑孔、４ｘｌ0４个／孔、５ｘｌ0４个／孔、６＞＜１0４个／孔四组趋于稳定，７ｘｌ0４个／孔、８＞＜１０４逡逑个两组趋于下降。因此，ＲＡＷ２６４．７细胞选择３ｘｌ０４个／孔为接种密度（图１）。逡逑二灥＿逡逑。５邋逦：＝逡逑0邋－—．邋逦邋逦逦邋—邋逦８ｎ0４逡逑１２ｈ逦２４ｈ逦３６ｈ逦４８ｈ逦６０ｈ逦７２ｈ逦８４ｈ逦９６ｈ逡逑时间逡逑图１逦ＲＡＷ２６４．７细胞的生长曲线逡逑Ｆｉｇ．邋１．邋Ｇｒｏｗｔｈ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ＲＡＷ２６４．７邋ｃｅｌｌｓ逡逑ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１邋细胞以邋ｌｘｌ0３邋个／孔、２ｘｌ0３邋个／孔、３ｘｌ0３邋个／孔、４ｘｌ0３邋个／孔、５ｘｌ0３逡逑个／孔、６ｘｌ0３个／孔、７ｘｌ0３个／孔、８ｘｌ0３个／孔的密度分别接种于９６孔板中培养逡逑２４ｈ时ｌｘｌ0３个／孔、２ｘｌ0３个／孔两组未达对数期，其余各组均达对数期；４８ｈ后逡逑均达到对数生长期；７２ｈ时ｌｘｌＯ４个／孔、２ｘｌ0４个／孔两组仍成对数生长

ｌＯＯ＾ｇ／ｍｌ）及对照组作用ＲＡＷ２６４．７细胞和ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞４８ｈ后，对照组逡逑ＲＡＷ２６４．７细胞细胞贴壁生长状态良好，均匀平铺于培养瓶底部，细胞成类圆形，逡逑形态大小不一，培养瓶中细胞漂浮物较少（图３．ａ）。０．０１｜ｉｇ／ｍｒＴｃ－ＭＤＰ浓度组，逡逑ＲＡＷ２６４．７细胞生长受到轻微抑制，细胞贴壁生长，形态大小不一，培养瓶中见逡逑少量细胞漂浮（图３．ｂ）。１０0ｎｇ／ｍｌ＂Ｔｃ－ＭＤＰ浓度组，ＲＡＷ２６４．７细胞细胞生长逡逑受到显著抑制，，细胞皱缩体积变小，培养瓶中见大量细胞碎片及漂浮（图３．ｃ）。逡逑■■■逡逑ａ．对照组；ｂ．邋０．０１邋ｎｇ／ｍｌ浓度组；ｃ．邋ｌＯＯｐｇ／ｍｌ浓度组逡逑图３邋ｗＴｃ－ＭＤＰ对ＲＡＷ２６４．７细胞生长影响的观察０２００）逡逑Ｆｉｇ．邋３．邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋＂Ｔｃ－ＭＤＰ邋ｏｎ邋ｇｒｏｗｔｈ邋ｏｆ邋ＲＡＷ２６４．７邋Ｃｅｌｌｓ邋（ｘ２００）逡逑对照组ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞贴壁生长状态良好，均匀平铺于培养瓶底部，逡逑２０逡逑
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R96

【参考文献】

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本文编号：2638409