有机阴离子转运体（Oats）在阿德福韦肾间质动力学及其所致肾损伤中的作用

发布时间：2020-04-27 11:29

【摘要】：目的考察肾小管上皮细胞基底膜侧的有机阴离子转运体(Organic anion transporters,Oats)对阿德福韦肾间质动力学的影响;并初步探讨Oats在阿德福韦所致肾损伤中的作用。方法1)大鼠随机分为阿德福韦组和阿德福韦+丙磺舒组,分别灌胃给予10 mg/kg阿德福韦,或10 mg/kg阿德福韦和30 mg/kg丙磺舒溶液,单次给药,收集不同时间段尿液,称重后,采用HPLC-MS/MS测定尿液中阿德福韦浓度,并计算其累计尿排泄量。2)大鼠随机分为溶媒对照组、阿德福韦组和阿德福韦+丙磺舒组,分别灌胃给予等体积溶媒,10 mg/kg阿德福韦,10 mg/kg阿德福韦和30 mg/kg丙磺舒溶液,每日一次,给药周期为1、7、14和28天,于末次给药后2小时,腹主动脉采血,取肾脏组织,采用HPLC-MS/MS测定肾脏、肾皮质、肾髓质和血中阿德福韦浓度浓度。3)大鼠随机分为阿德福韦组和阿德福韦+丙磺舒组,分别灌胃给予10 mg/kg阿德福韦,或10 mg/kg阿德福韦和30 mg/kg丙磺舒溶液,每日一次,给药周期为1、7、14和28天,于末次给药后2小时后,运用肾脏微透析技术收集不同时间段肾间质透析液,采用HPLC-MS/MS测定间质透析液中的阿德福韦浓度。4)大鼠随机分为三组,采用离体肾灌流-肾间质微透析技术,分别用含47.25μg/ml阿德福韦(低剂量组)、141.75μg/ml阿德福韦(高剂量组)、47.25μg/ml阿德福韦和100μg/ml丙磺舒(灌流合用组)的灌流液进行灌流,测定不同组间质透析液中阿德福韦的浓度。5)大鼠随机分为溶媒对照组、阿德福韦组、丙磺舒组和阿德福韦+丙磺舒组,分别灌胃给予等体积溶媒,10 mg/kg阿德福韦,30 mg/kg丙磺舒和10 mg/kg阿德福韦和30 mg/kg丙磺舒,给药周期为1、7、14和28天,于末次给药后2小时,腹主动脉采血,取肾脏组织,采用HPLC-MS/MS测定肾脏、肾皮质、肾髓质和血中阿德福韦浓度和尿毒素物质浓度;采用生化分析仪,测定血中尿素氮、血肌酐、尿酸、血清磷和胱抑素C浓度;采用HE、Masson染色和天狼猩红染色技术考察并评价肾脏病理学变化;采用Westen Blot技术考察大鼠肾脏Oat1和Oat3表达变化。结果1)与阿德福韦组相(单用组)比,单次给药后阿德福韦+丙磺舒组(合用组)的阿德福韦12 h累计尿排泄量显著减少(P0.05)。药物干预1、7、14和28天后,合用组阿德福韦血药浓度较单用组均显著升高(P0.05,P0.05,P0.05,P0.05);且肾脏、肾皮质和肾髓质中阿德福韦浓度亦显著升高(P0.05,P0.05,P0.05)。2)药物干预1、7、14和28天后,发现合用组肾间质中阿德福韦的AUC和Cmax较单用组显著增加(P0.05,P0.05,P0.05,P0.05),而其CL显著降低(P0.05,P0.05,P0.05,P0.05)。3)与低剂量阿德福韦灌流组相比,高剂量阿德福韦灌流组和丙磺舒+阿德福韦灌流组肾间质中阿德福韦浓度均显著性增加(P0.01,P0.05),分别增加了40%和102.3%。4)与单用组相比合用组灌胃给药28天后,肾脏中3-脱氧葡萄糖酮,乳清酸浓度显著增加(P0.05,P0.05),血浆中N2-乙酰-L-精氨酸、尿苷、NG-NG'Dimethy-L-精氨酸和2H-Pyrrolo[3,4-d]异恶唑-6-羧酸浓度显著性增加(P0.05,P0.05,P0.05,P0.05);生化指标变化无规律性。天狼猩红染色结果:溶媒对照组和单用组中胶原纤维呈黄橙色,合用组中胶原纤维呈黄绿色;Masson染色结果:合用组相较于单用组和溶媒对照组,肾间质纤维化14、28天显著增多,而溶媒对照组和单用组中未检测到肾间质纤维化。5)阿德福韦单独灌胃给药组与溶媒对照组相比,肾脏中Oat1的蛋白表达量在28天显著降低(P0.05),Oat3的蛋白表达量在14和28天时明显的降低(P0.05,P0.01)。结论1)阿德福韦在肾间质的浓度显著高于其血浆浓度,随着肾小管上皮细胞摄取型转运体Oats表达降低或其功能的抑制,都进一步使肾间质中阿德福韦清除降低,蓄积显著增加;2)肾间质中阿德福韦的蓄积与肾小管上皮细胞坏死和凋亡以及肾间质纤维化密切相关,且随着Oats抑制剂的合用,进一步加重其肾损伤的程度。
【图文】：

其所致肾损伤中的作用巴细胞及单核细胞，也可见嗜酸性白细胞及浆细胞；局灶性、片状性和弥散性间质水肿；灶状小管萎缩以及纤维化等[18]。不同的药物造成的肾损伤，呈现为同的特定的形态学特征，如马兜铃酸造成的肾损伤，主要表现为慢性肾小管间纤维化，光学显微镜下可见肾间质呈多灶状或大片状寡细胞性纤维化，偶有少散在的淋巴细胞及炎症细胞浸润，肾小管萎缩，肾小球缺血性基膜皱缩和硬化庆大霉素造成的肾损伤表现为肾小管上皮细胞中出现髓样小体；铅类化合物造的肾损伤主要表现为细胞内出现铅和铅-蛋白结合物组成的包合物；青霉素以西咪替丁引起的肾损伤主要病理学表现为以 CD4＋细胞为主的炎症细胞浸润非甾体抗炎药( non-steroidal anti-inflammatory drugs ,NSAIDs)引起的肾损伤病理学变化以 CD8＋细胞为主的炎症细胞浸润[20-22]。

研究生学位论文 有机阴离子转运体（Oats）在阿德福韦的肾间质动力其所致肾损伤中的作用l）[83]。Knepper 等学者认为肾间质透析液中高的内源性物质浓度可半流动的胶体，物质分子在间质中的移动速度相对较慢有关，并指出为独立于血液大循环的生理区域[84]，，由此可见，肾间质特有的生理特蓄积内、外源性物质的潜质。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R965

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本文编号：2642208