藿香内生真菌次级代谢产物生物活性及正丁醇部位化学成分的研究

发布时间：2020-05-04 11:53

【摘要】：近些年来,药用植物内生真菌次级代谢产物已经成为开发新药和新颖结构化合物的重要来源之一,具有很重要的生态学与经济学意义,已经成为了中药学、微生物学、植物保护学等众多学科研究的重点。甘肃省内气候类型多样、生态类型众多,因此孕育了种类丰富的野生药用植物资源。文献报道以药用植物的化学成分的研究为主,对药用植物的内生真菌的种类与其次级代谢产物的研究较少。本研究以甘肃本地产的藿香为研究对象,对藿香中的内生真菌的种类、内生真菌次级代谢产物的抗氧化、清除DPPH自由基活性及次级代谢产物的化学成分进行了研究,研究内容与结果如下:从药用植物藿香的花中,采用表面消毒法与组织分离法,分离纯化得到13株内生真菌。对其显微结构进行形态学鉴定,分属于丝核菌属、黑孢霉属、长蠕孢菌属、短蠕孢菌属、丝孢菌属、链格孢菌属、镰刀菌属和头孢霉菌属。将13株内生真菌进行少量液体发酵,用乙酸乙酯和正丁醇对13株内生真菌发酵液进行萃取,菌丝体乙醇回流提取,萃取完的菌液减压蒸干,分别得到:菌液的乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位及菌丝体的乙醇提取物。用微量肉汤稀释法与TLC-生物自显影法对内生真菌次级代谢产物的各个部位的抗菌与DPPH自由基清除活性进行测定。体外抗菌活性实验测定的结果显示:具有抗菌活性的物质主要集中在乙酸乙酯部位与正丁醇部位,以乙酸乙酯部位为主。菌株H-2的次级代谢产物的乙酸乙酯部位的抗菌活性最好,对六种供试细菌的MIC值为250μg/mL。菌株H-9的乙酸乙酯部位对无乳链球菌的MIC值均为31.25μg/mL,对其余五株供试细菌的MIC值为500μg/mL。而正丁醇部位也具有抗菌活性,菌株H-2、H-5、H-6、H-9的正丁醇部位对六种供试细菌的MIC值均为1000μg/mL。体外DPPH自由基清除实验结果显示:具有清除DPPH自由基活性的物质主要集中在内生真菌次级代谢产物的乙酸乙酯部位。在13株内生真菌中,菌株H-9次级代谢产物的乙酸乙酯部位清除DPPH自由基的能力最强。当DPPH甲醇溶液浓度为0.1%(w/v)时,菌株H-9次级代谢产物的乙酸乙酯部位清除DPPH自由基的单位面积清除率相当于阳性对照0.75 mg/mL的Vc溶液的单位面积清除率的70.15±3.70%,菌株H-13的乙酸乙酯部位也具有很强的清除DPPH自由基的能力,其清除率相当于阳性对照0.75 mg/mL的Vc溶液的单位清除率的48.84±4.68%。对菌株H-2和菌株H-9进行分子生物学鉴定分别为黑孢霉菌属与链格孢菌属。将实验室现有的一株其次级代谢产物具有良好清除DPPH自由基活性的藿香内生真菌Y-2作为研究对象,利用大孔树脂柱、硅胶柱和Sephadex LH-20凝胶柱等色谱柱方法,并结合薄层层析色谱检识,分离纯化从发酵液的正丁醇部位中得到2个单体化合物,应用核磁共振碳谱氢谱及质谱对化合物结构进行鉴定,化合物1鉴定为5α,8α-环二氧麦角甾-6,22-二烯-3β-醇,化合物2由于含量较少没有得到明确的结构。
【图文】：

图 2.1 藿香花中内生真菌的显微结构图注：(a)-丝核菌菌丝 (b)-黑孢霉菌分生孢子头 (c)-长蠕孢菌分生孢子 (d)-短蠕孢菌分生孢子与菌丝 (e)-丝孢菌菌丝 (f)-链格孢菌分生孢子与分生孢子梗 (g)-镰刀菌属分生孢子与分生孢子梗 (h)-头霉孢菌孢子与分生孢子梗运用植物组织平板分离法对藿香花中内生真菌进行分离纯化，所得到的分离结果与表面消毒所用消毒剂的种类、消毒时间、培养基种类和组织块的大小等因素等有密切的关系。例如，在植物中存在的内生真菌并不能全部被分离纯化出来，这是由于在植物体外不能完全模拟在宿主植物体内相同或者相似的生态环境或者活性物质，使原本在宿主生存的内生真菌不能够被分离出来。因此，要不断改变培养基的种类以不断适应不同种类的内生真菌对营养物质的需求，以获得更多种类的内生真菌。在分离过程中，先从植物组织块上长出的内生真菌不能在以后的纯化过程中被分离得到，，这可能也是由于培养基中缺乏生长繁殖必须的营养物质造成的。在对植物组织进行表面消毒的过程中，消毒剂既能杀死植物组织表面的微生物，同时对植物组织的细胞也造成了一定的损伤，所以在实验过程中要根

菌株H-2的系统发育树
【学位授予单位】：兰州理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R915

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本文编号：2648500