AFP单抗修饰的载DCN基因PLGA靶向纳米粒的制备及其体外活性研究

发布时间：2017-03-24 03:12

  本文关键词：AFP单抗修饰的载DCN基因PLGA靶向纳米粒的制备及其体外活性研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:制备甲胎蛋白(AFP)单克隆抗体修饰的载核心蛋白聚糖基因(DCN)质粒的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)靶向纳米缓释颗粒,并研究其理化特性以及对Hep G2细胞抑制作用。方法:第一部分1采用复乳溶剂挥发法制备靶向AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒子,扫描电镜观察其形貌,激光粒度仪测定其粒径,并对不同批次的PLGA纳米粒进行包封率、载药量及体外释放率的检测;2采用羧基荧光素和罗丹明荧光素对Ig G-PLGA-rh DCN纳米粒子和AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒子进行双荧光标记,分别在4h及12h时观察纳米粒进入Hep G2细胞的情况;3 RT-PCR鉴定AFPm Ab-PLGA-rhDCN纳米粒在HepG2细胞中的表达情况。第二部分1 MTT法检测纳米粒子对Hep G2细胞的增殖抑制作用;2 Ig G-PLGA-rh DCN纳米粒子和不同浓度的AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒子作用Hep G2细胞48h后,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率和细胞周期;3实时荧光定量PCR检测纳米粒子作用48h后各组细胞中Bcl-2基因和caspase-3基因的表达情况。结果:第一部分1复乳法制备的纳米粒子形态规则,表面平整,平均粒径为216.7±8.2nm,Zeta电位为-17.4m V;纳米粒子的包封率平均为:78.60±1.03%,载药量平均为:3.12±0.17%;纳米粒子在体外缓慢平稳释放,在240h时释放率达到79.3%;2 Hep G2细胞摄取实验结果显示,AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒子有生物靶向作用,可在细胞中大量富集;3 RT-PCR琼脂糖凝胶电泳结果显示,AFPmAb-PLGA-rhDCN纳米粒子中的DCN基因可在Hep G2细胞中表达。第二部分1 MTT实验中,与对照组相比,不同浓度的AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒子对Hep G2细胞均有显著的增殖抑制作用(p0.05);2流式细胞术检测结果中,实验组细胞的早期凋亡率明显高于对照组(p0.01),且随纳米粒子浓度的升高而升高;三个实验组细胞周期的S期、G2期比例明显降低,与对照组相比差异有统计学意义(p0.01),而G1期比例相对升高;3实时荧光定量PCR结果:Bcl-2基因在实验组中的表达随纳米粒子浓度的增高逐渐降低,而caspase-3基因则逐渐升高,与对照组相比均有统计学差异(p0.01)。结论:1成功制备了具有缓释作用的AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒子,可与Hep G2细胞特异性靶向结合,并且纳米粒中的DCN基因可在细胞中成功表达。2在体外,AFPm Ab-PLGA rhDCN纳米粒子可明显抑制HepG2细胞的增殖、促进其早期凋亡,且凋亡机制可能与Bcl-2和caspase-3相关。
【关键词】：核心蛋白聚糖 PLGA HepG2细胞 AFP单抗 Bcl-2 caspase-3
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R943
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 常用缩写词中英文对照表10-11
• 前言11-13
• 第一部分AFP单抗修饰的载DCN基因PLGA靶向纳米粒的制备、物理性质及靶向性检测13-29
• 1 材料与方法13-21
• 1.1 实验主要材料13-15
• 1.2 实验方法15-20
• 1.3 数据统计学处理20-21
• 2 结果21-26
• 2.1 质粒酶切消化鉴定结果21
• 2.2 重组质粒中DCN基因测序结果21-22
• 2.3 纳米粒子外观形态和粒径22
• 2.4 纳米粒子的包封率及载药量22-23
• 2.5 纳米粒的体外释放23
• 2.6 纳米粒子的体外细胞主动摄取23-25
• 2.7 纳米粒在HepG2 细胞中的表达鉴定结果25-26
• 3 讨论26-28
• 4 小结28-29
• 第二部分AFP单抗修饰的载DCN基因PLGA靶向纳米粒对HepG2 细胞抑制作用的研究29-43
• 1 材料与方法29-33
• 1.1 实验主要材料29-30
• 1.2 实验方法30-32
• 1.3 数据统计学处理32-33
• 2 结果33-40
• 2.1 细胞增殖抑制实验结果33-34
• 2.2 细胞凋亡率结果34-35
• 2.3 细胞周期结果35-38
• 2.4 实时荧光定量PCR基因表达结果38-40
• 3 讨论40-42
• 4 小结42-43
• 参考文献43-47
• 综述47-57
• 参考文献54-57
• 致谢57-58
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果58-59
• 个人简介59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 汪银雄,段银钟,吴红,孙应明;P物质-PLGA纳米缓释微粒的制备及其性质测定[J];临床口腔医学杂志;2005年11期

2 陈t

本文编号：265004