治疗原发性肺癌的肺吸入吉非替尼纳米制剂及姜黄素脂质体粉雾剂的研究

发布时间：2020-05-11 09:55

【摘要】：肺癌是临床最常见的恶性肿瘤之一,主要包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌,其中非小细胞肺癌(NSCLCs)占肺癌比例的85%左右,5年生存率约15%。目前肺癌的临床治疗手段主要是手术、放疗、化疗,其中化疗基本为口服或静脉给药,药物全身分布,达到肺癌组织的药物量有限。光动力学疗法(PDT)是一种新型治疗手段,利用光敏剂在一定波长激光激发下产生单线态氧的原理,杀死周围肿瘤细胞。决定PDT效果的关键是肿瘤组织内有一定量光敏剂和激发光能到达病变组织。吉非替尼是第一个表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂,属分子靶向药物。吉非替尼的上市剂型为口服片(Iressa~?),药物吸收后到达肺部的药物量有限。而口服后药物分布到其他组织会带来一些副作用,如腹泻,皮疹,皮肤干燥和痤疮等。同时由于其价格昂贵,也带来较高的治疗成本。本研究制备了吉非替尼的脂质体和纳米粒,并进一步制备成肺吸入制剂,可将吉非替尼直接输送至肺部。与吉非替尼片比较,吉非替尼纳米粉雾剂的肺组织分布量大,维持时间长,药效显著提高。在此基础上,进一步考察了肺吸入吉非替尼纳米制剂联合PDT治疗肺癌的效果。姜黄素已被证明具有抗肿瘤效果,但其易氧化、水溶性差、体内代谢快,限制了姜黄素的临床应用。本研究制备了肺吸入姜黄素脂质体粉雾剂,与肺吸入姜黄素原料粉末、吉西他滨溶液比较,前者的药效强。本文深入探讨了其抗肺癌机制。1.吉非替尼纳米制剂的制备及性质用乙醇注入法制备吉非替尼脂质体,经冻干和筛分获得吉非替尼脂质体粉雾剂,并用正交试验筛选获得最优处方,即大豆磷脂:胆固醇:吉非替尼=15:3:5(mol/mol),占25%,甘露醇占75%;复溶后的脂质体粒径为79.22nm。用紫外分光光度法和凝胶柱色谱法测定吉非替尼脂质体的载药量为5.91%,包封率为98.09%。粉雾剂空气动力学粒径为5.32μm,肺部沉积率为35.23%,适合肺吸入给药。用乳化法制备吉非替尼聚乳酸羟基乙酸(PLGA)纳米粒,粒径为222.53nm。用高效液相色谱法和离心法测定吉非替尼纳米粒的含药量为5mg/mL,包封率为100%。2.吉非替尼制剂药代动力学建立原发性大鼠肺癌模型,肺部给药吉非替尼原料、吉非替尼脂质体粉雾剂以及口服吉非替尼片,用高效液相色谱法(HPLC)检测血药浓度和组织分布,发现相同给药剂量下,三组血药浓度相当,但吉非替尼原料和脂质体组中的肺组织药物浓度是口服组的5倍以上,口服组的肝中药物浓度显著高于肺给药组,原料组的药物肺滞留时间较长。3.吉非替尼制剂药效学原发性肺癌大鼠分别进行口服吉非替尼片、肺部给药吉非替尼原料药或吉非替尼脂质体粉雾剂。与口服组比较,原料及脂质体组的肺组织损伤减轻,肺泡灌洗液中炎症因子(TNF-α、总蛋白)显著降低,肺组织EGFR和AKT被显著抑制。脂质体组的肺癌细胞线粒体膜电位降低,Caspase-3水平升高,凋亡增强,与口服和原料组比较均有显著性差异。原发性肺癌大鼠肺部给药吉非替尼纳米粒,以及单独或联合5-氨基酮戊酸(5-ALA)PDT(660nm,30s),经1周治疗,吉非替尼联合PDT的疗效比单独吉非替尼或单独PDT好。4.姜黄素脂质体粉雾剂的制备及性质用薄膜分散法制备姜黄素脂质体,然后用喷雾干燥法制备姜黄素脂质体粉雾剂,并用正交试验筛选获得最优处方,即大豆磷脂:姜黄素=2:1(mol/mol),占17%,乳糖占83%;复溶后的脂质体粒径为20~30nm。离心后用HPLC测定姜黄素脂质体的载药量为3.5%,包封率为89.1%。粉雾剂空气动力学粒径为5.81±0.06μm,肺部沉积率为46.71%,适合肺吸入给药。5.姜黄素的细胞毒性考察姜黄素原料和脂质体对人肺癌A549细胞和人支气管上皮BEAS-2B细胞的毒性,其中姜黄素脂质体比姜黄素原料的A549细胞摄取率高,诱导A549细胞凋亡,细胞毒性强;对BEAS-2B细胞有一定毒性,100μmol/L时,但姜黄素脂质体的选择指数是姜黄素原料的90倍左右。6.姜黄素粉雾剂的药效学原发性肺癌大鼠分别进行吉西他滨溶液、姜黄素原料、姜黄素脂质体粉雾剂肺部给药。与吉西他滨组和原料组比较,脂质体组的肺组织损伤减轻,肺泡灌洗液和肺组织中炎症因子(TNF-α、MDA、Bcl-2)显著降低。脂质体组的肺癌细胞线粒体膜电位降低,Caspase-3水平升高,凋亡增强,与吉西他滨组和原料组比较有显著性差异。姜黄素副作用小,肺部给药克服了其缺点,可能成为新一代肺吸入治疗肺癌的有效药物。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R943

【参考文献】