β-酪啡肽-7对衰老小鼠肠黏膜免疫的调节作用及机制研究

发布时间：2020-05-16 13:23

【摘要】：目的研究β-酪啡肽-7的摄入对自然衰老的机体肠组织形态、肠上皮淋巴细胞、肠黏膜免疫细胞因子、肠黏膜氧化应激的影响,初步研究β-酪啡肽-7影响肠黏膜免疫的分子机制,为进一步深入开发利用β-酪啡肽-7提供科学资料。方法48只老年雄性昆明小鼠、12只青年雄性昆明小鼠适应性喂养一周后,44只老年小鼠随机分为低、中、高剂量组和老年模型组四组,每组各11只;11只青年小鼠设为青年对照组。将干粉β-CM-7以生理盐水配制成低、中、高浓度分别为0.2×10-64mol/L、1×10-6 mol/L、5× 10-6 mol/L的溶液,剂量组每只每天灌胃β-CM-7溶液0.5ml,青年对照组和老年模型组灌胃等体积的0.9%生理盐水。每周称重一次,连续灌胃30天后颈椎脱臼处死。取小鼠十二指肠、空肠、回肠肠段,采用HE染色法测定小肠VH、CD、V/C、黏膜厚度、肠上皮淋巴细胞;取小鼠空肠黏膜测定小肠黏膜中IL-2、TNF-α、SIgA、SOD、MDA、CAT含量,并采用实时荧光定量PCR测定NF-κB、TRAF6及TLR4基因的相对表达量。结果1.β-酪啡肽-7对衰老小鼠肠组织形态、淋巴细胞的影响老年模型组与青年组相比,十二指肠段上皮淋巴细胞数量降低(P0.01),肠黏膜厚度增加(P0.05),V/C值显著降低(P0.05);空肠段上皮淋巴细胞数量降低(P0.05),V/C值降低(P0.01);回肠段黏膜厚度、绒毛长度、V/C值降低(P0.01),隐窝深度升高(P0.01)。剂量组与模型组相比,各剂量组均能提高十二指肠上皮淋巴细胞数量(P0.01)、空肠上皮淋巴细胞数量(P0.05)和回肠上皮淋巴细胞数量,其中高剂量组有差异(P0.05)。低剂量组能显著提高小鼠十二指肠、空肠绒毛长度(P0.05),提高三个肠段的V/C值(P0.01);中剂量组能显著增加回肠黏膜厚度(P0.01),提高十二指肠、回肠绒毛长度(P0.05),降低回肠隐窝深度(P0.05),提高十二指肠V/C值(P0.05)和空肠、回肠V/C值(P0.01);高剂量组能提高回肠肠绒毛长度及空肠和回肠的V/C值(P0.01)。2.β-酪啡肽-7对衰老小鼠肠黏膜免疫细胞因子的影响老年模型组TNF-α含量高于青年对照组(P0.01)。剂量组与老年模型组相比,低、中剂量组能显著降低TNF-α含量(P0.05);低剂量组能显著提高衰老小肠黏膜IL-2的含量(P0.05)。低、中剂量组SIgA含量略微降低(P0.05),高剂量组SIgA含量略升高(P0.05)。3.β-酪啡肽-7对衰老小鼠体质量、肠黏膜氧化应激的影响剂量组、老年模型组干预结束时体重相比初始体重略微下降,青年对照组小鼠干预结束时体重相比初始体重略微上升,但差异均不具有统计学意义(P0.05)。老年模型组小鼠肠黏膜SOD、CAT活性显著低于青年对照组(P0.01),MDA含量显著高于青年对照组(P0.01)。剂量组与老年模型组相比,低、中剂量组均能显著提高小肠黏膜SOD活性(P0.01),降低MDA含量(P0.05);低剂量组能显著提高CAT活性(P0.01);高剂量组能显著降低MDA含量(P0.01)。4.β-酪啡肽-7对衰老小鼠肠黏膜TLR4、TRAF6、NF-κB的影响老年模型组肠黏膜TLR4、TRAF6、NF-κB相对表达量低于青年对照组,其中TRAF6、NF-κB的差异有显著性(P0.05或P0.01)。剂量组与模型组相比,低剂量组能上调TLR4、TRAF6相对表达量(P0.01)和NF-κB相对表达量(P0.05);中剂量能上调TLR4、NF-κB相对表达量(P0.01)和TRAF6相对表达量(P0.05)。结论机体衰老导致小肠组织结构改变,抗氧化酶的含量减少,肠道黏膜处于氧化应激状态,小肠黏膜中促炎细胞因子的浓度增加,免疫因子的分泌减少,抑制免疫发挥作用途径中相关因子的活化,降低了小肠黏膜免疫系统的功能。β-CM-7可以缓解衰老对小肠组织结构的损伤,刺激小肠上皮淋巴细胞的分化,显著提高小肠黏膜抗氧化应激酶的活性,减少过氧化引起的细胞损伤,提高小肠黏膜免疫因子的活性,降低小肠黏膜中促炎因子的含量,提高免疫相关基因的活化程度,从而增强小肠黏膜免疫功能。提示β-CM-7对衰老小肠黏膜免疫系统有一定的保护作用。
【图文】：

图２－１小鼠十二指肠组织结构（ＨＥ染色）（２0ｘ）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－１邋Ｔｉｓｓｕｅ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ｍｏｕｓｅ邋ｄｕｏｄｅｎｕｍ邋（ＨＥ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ）邋（２0ｘ）逡逑由图２－１可以看出，青年对照组十二指肠绒毛细长，，排列较整齐；老年模型组十二指逡逑肠绒毛宽度增加、长度缩短，排列稀疏，上皮细胞间排列不整齐，间质萎缩；各Ｐ＊ＣＭ－７逡逑干预组十二指肠绒毛较老年模型组绒毛匀称细长，结构完整，排列恢复整齐。逡逑表２－３为各组小鼠十二指肠绒毛长度、隐窝深度及Ｖ／Ｃ值的数据结果。逡逑表２－３邋ｐ－酪啡肽－７对小鼠十二指肠绒毛长度、隐窝深度及Ｖ／Ｃ值的影响逡逑Ｔａｂｌｅ邋２－３邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋Ｐ－Ｃｙｔｏｍｏｒｐｈｉｎ－７邋ｏｎ邋ｄｕｏｄｅｎａｌ邋ｖｉｌｌｕｓ邋ｌｅｎｇｔｈ，邋ｃｒｙｐｔ邋ｄｅｐｔｈ邋ａｎｄ邋Ｖ／Ｃ邋ｖａｌｕｅ邋ｉｎ邋ｍｉｃｅ逡逑组别逦绒毛长度４？ｎ逦Ｉｔ、窝深度／Ｈｍ逡逑青年对照组逦１８丨．７４±５４．６９逦４３．４９±１３．０９逦４．２６±０．９９＊逡逑老年模型组逦１６２．５９±５３．２８逦５３．０３±１４．１６逦３．１３±１．０５逡逑低剂量组逦２４９．６３±４３．５３＊逦４８．５９±７．３９逦５．２２±１．１３＊＊逡逑中剂量组逦２３３．３３±４５．１５＊逦５２．６８±２．７９逦４．４４±０．９０＊逡逑高剂量组逦２２７．４１±７２．０８逦５１．４３±８．２２逦４．３５±０．７８逡逑注：＊与老年模型组相比，尸＜0．0５；邋＊＊与老年模型组相比，Ｐ＜０．０１。逡逑由表２－３可知，老年模型组与青年对照组相比，老年模型组小鼠肠黏膜绒毛长度低于逡逑青年对照组

年模型组之间差异不具有统计学意义（办0．0５）。逡逑２．３．２空肠绒毛长度、隐窝深度及Ｖ／Ｃ值逡逑图２－２为各组小鼠空肠切片的ＨＥ染色结果。逡逑（ａ）青年对照组逦（ｂ）老年模型组逡逑ｍｍｍ逡逑（ｃ）低剂量组逦（ｄ）中剂量组逦（ｅ）高剂量组逡逑图２－２小鼠空肠组织结构（ＨＥ染色）（２０＞＜）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋Ｍｏｕｓｅ邋ｊｅｊｕｎａｌ邋ｔｉｓｓｕｅ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋（ＨＥ邋Ｓｔａｉｎｉｎｇ）邋（２0ｘ）逡逑由图２－２可以看出，青年对照组空肠绒毛均匀细长，呈指状、整齐排列；衰老模型组逡逑空肠绒毛脱落、缺损，肥大肿胀，长度缩短，排列稀疏，黏膜厚度增加、密度降低，间质逡逑明显萎缩；Ｐ＾ＣＭ－７干预组空肠绒毛较老年模型组绒毛间隙明显缩小，肿胀现象减轻。逡逑表２＊４为Ｐ－酪啡肽－７对各组小鼠空肠绒毛长度、隐窝深度及Ｖ／Ｃ值影响的数据结果。逡逑
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R965

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本文编号：2666797