二氢杨梅素长循环脂质体的制备、特性及大鼠体内药代动力学研究

发布时间：2020-05-16 15:59

【摘要】：二氢杨梅素(Dihydromyricetin,DMY)属于二氢黄酮醇类化合物,主要存在于我国中南部地区的显齿蛇葡萄植物茎叶中,具有明显的祛痰、消炎、止咳、降脂、保肝护肝、解轻度乙醇中毒、抗肿瘤等作用。然而,二氢杨梅素存在稳定性差,吸收差,生物利用度低等特性,极大限制了其临床应用。长循环脂质体能够有效地保护其包封的药物进入体内后被网状内皮系统吞噬和破坏,从而延长药物的作用时间,提高其生物利用度。本研究选择PEG修饰的长循环脂质体为传递载体,采用薄膜超声法为制备方法,成功制备了二氢杨梅素长循环脂质体,以期为其制剂研究提供理论上的支持。本论文将从以下四个章节阐述:第一章分为两部分内容:首先对脂质体的研究进展进行了综述,包括脂质体的制备技术、稳定性影响因素、药动学特点以及应用研究进展等;然后对二氢杨梅素的理化性质、制剂研究现状等研究进行了综述。第二章首先采用HPLC法建立了检测二氢杨梅素含量的分析方法,结果显示,该方法准确、高效。随后,采用薄膜超声法制备了二氢杨梅素长循环脂质体,并以包封率为评价指标,利用单因素实验和正交实验对其处方和制备工艺进行了优化,结果得到其最优处方和制备工艺为:大豆磷脂酰胆碱:胆固醇:二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(物质的量比)为75:20:5,二氢杨梅素:脂类(质量比)为1:12,水化温度为60℃,水化介质为pH 5.0 PBS缓冲液,超声时间25 min。所制得脂质体包封率可达到(54.7±3.3)%,载药量为(4.3±0.2)%。对其粒径、电位、形态研究发现,其粒径约为(117.9±5.5)nm,分散均匀,多分散性指数为0.19±0.02,与透射电镜观察结果一致,Zeta电位为(-2.6±1.7)mV。体外释药结果显示在pH 1.2和pH 6.8释放介质中,二氢杨梅素脂质体释放速率较游离的缓慢,均以一级动力学模型拟合度最高,表明制备的脂质体可以达到缓慢释放二氢杨梅素的作用。第三章研究的是二氢杨梅素及其脂质体的初步稳定性,根据2015版药典要求选定外观性状、含量、氧化指数等作为考察项目,进行了二氢杨梅素脂质体的影响因素试验和加速实验。并且选定外观性状、含量和杂质含量为考察项目进行了二氢杨梅素原料药的影响因素实验和加速实验。主要考察了温度、光照、高湿对二氢杨梅素及其脂质体的影响。结果显示,温度、光照、高湿对二氢杨梅素及其脂质体均有影响,将二氢杨梅素包封于脂质体中可以提高其稳定性,且脂质体应注意避光、阴凉干燥处保存。第四章首先建立并验证了 UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中二氢杨梅素含量的分析方法。结果显示,该方法准确可靠,稳定性好。然后,按100 mg/kg的剂量,对SD大鼠口服灌胃等量的二氢杨梅素及脂质体混悬液以考察其在大鼠体内的药动学特性。结果显示,口服给药二氢杨梅素及其脂质体制剂后,二氢杨梅素脂质体在大鼠体内的MRT0～∞和t1/2z是游离二氢杨梅素的2.2倍和2.7倍,有显著性差异,说明脂质体制剂中的二氢杨梅素在大鼠体内的消除变慢,驻留时间延长,具有体内缓释的特点;AUC0～∞是游离二氢杨梅素的1.8倍,有显著性差异,表明二氢杨梅素长循环脂质体可明显延长其在大鼠体内的循环时间,改善其生物利用度。
【图文】：

醋酸钙,梯度法,模式图,原理

子状态存在，药物分子自发地向脂质体内部聚集［１８］，透过脂质体膜后在内水相中再形成逡逑离子型药物不能跨越膜而被包封［２１，２２］。在ｐＨ梯度法的基础上，针对弱酸或弱碱性的药逡逑物衍生出了两种特殊的形式（图１－２），即硫酸铵和醋酸钙梯度法。它们与常规的ｐＨ梯逡逑度法相比，不需要进行ｐＨ滴定操作，且内水相仅极短时间处于偏酸偏碱的环境，有利逡逑于脂质体的稳定。逡逑ｐＨ梯度法制备的一般流程：①先用被动载药法制备空白脂质体，，水化选用偏酸或逡逑偏碱的介质；②调节脂质体外水相ｐＨ，使之形成内外ｐＨ梯度；③加入两亲性药物后在逡逑一定温度下孵育适当的时间，使药物分子跨膜转运入内水相；④去除外水相中未包封的逡逑游离药物即可。硫酸铵或醋酸钙梯度法制备的一般流程：①先用被动载药法制备空白脂逡逑质体，水化介质选用硫酸铵或醋酸钙溶液；②用凝胶色谱法、透析法等去除外水相中硫逡逑酸铵和醋酸钙；③加入两亲性药物后在一定温度下孵育适当的时间，使药物分子跨膜转逡逑运入内水相；④去除外水相中未包封的游离药物即可。逡逑孑邋￥逦＾逦＾邋ｊ逡逑％邋１邋＾逡逑，多栥各１’／々々产逡逑ｍ＾ｎ？ｎｍｓ邋ｐｉｓ＊＃＊逦４邋Ｈ＊逡逑ｉ１逦逦１逡逑Ｂ邋？

色谱图,二氢杨梅素,专属性,色谱图

２．３．１．１专属性试验逡逑将配置好的二氢杨梅素对照溶液、空白脂质体对照液、供试品溶液进ＨＰＬＣ检测，逡逑记录色谱图（图２－１）。逡逑ＣＮ逡逑；逦逡逑：Ｂ逡逑；—气？逦逡逑Ｃ逡逑？逦0逡逑■逦ＪＯ逡逑＿逦＜0逡逑ｊ逦逡逑Ｉ￣１邋￣１邋￣１邋￣１邋￣Ｉ￣１邋￣！￣１邋￣１邋￣Ｉ￣１邋￣＇￣！￣１邋￣Ｉ￣１邋￣１邋￣１邋￣１邋￣Ｉ￣１邋￣１邋￣１邋￣１邋￣Ｉ￣１邋￣１邋￣１邋￣１邋￣Ｉ￣１邋￣１邋￣１邋￣１—ｉ￣１邋￣１—１邋￣１邋￣Ｉ￣１邋￣１邋￣１邋￣１邋￣Ｉ￣ｒ逡逑０１２３４５６７８９逡逑图２－１二氢杨梅素专属性色谱图逡逑Ａ－二氢杨梅素对照液Ｂ－空白溶液Ｃ－供试液逡逑１６逡逑
【学位授予单位】：湖北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R943;R965

【参考文献】