翅果油亚微乳的制备、质量评价及其抗疲劳机理研究

发布时间：2020-05-17 08:02

【摘要】：目的:本文以翅果油为原料,拟将其制备成亚微乳,并优化其制备工艺,对制剂的进行质量评价及稳定性进行考察,且对其抗疲劳作用及其机理进行初步探讨。方法:(1)翅果油亚微乳的处方和工艺筛选:(1)对翅果油合适的HLB值进行考察;(2)单因素试验对翅果油亚微乳适宜的表面活性剂、助表面活性剂、防腐剂、甜味剂等各个组分进行筛选;(3)确定制剂中各组分的最适组成比例;(4)对制剂工艺影响较大的四个因素:温度、搅拌时间、转速、乳化方法进行单因素考察,在单因素基础上,采用正交设计优化制备工艺,将翅果油制备成O/W型初乳;(5)高压均质压力、均质次数考察,制备亚微乳。(2)翅果油亚微乳的质量评价:根据2015版药典的规定,《保健食品管理办法》以及《保健食品稳定性试验指导原则》通过外观性状、粒径、ζ电位、pH值、密度、离心试验、离心稳定性系数K_e值、亚油酸含量等指标对翅果油亚微乳进行理化性质的评价;建立气相色谱法(Gas Chromatography,GC)和高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)对翅果油亚微乳中亚油酸进行含量测定,并对两种方法进行方法学考察;进行制剂稳定性试验,考察其储存条件、时间等。(3)翅果油和亚微乳的缓解运动性疲劳及其机理的研究:将100只小鼠随机分为阴性对照组与翅果油低、中、高剂量组及亚微乳组,阴性对照组灌胃给予蒸馏水,试验组分别灌胃给予翅果油低(1.25 mL/kg)、中(2.5 mL/kg)、高(5mL/kg)剂量及亚微乳组(23.7 mL/kg,与低剂量组的载油量相当)。每组20只。对各试验组小鼠连续灌胃30 d,且隔天游泳训练1次,每次20 min~30 min,其中每组中的10只小鼠进行负重游泳试验,并测定其力竭游泳时间,另10只采用eLisa试剂盒测定小鼠运动前、后相关生化指标血乳酸(Blood Lactic acid,BLA),肝糖原(Hepatic glycogen,LG),血清尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)的含量变化。从而研究翅果油及其亚微乳缓解运动性疲劳效果,并进一步探讨其抗疲劳机理。结果:(1)经筛选得到翅果油最适的HLB值为9,翅果油亚微乳的表面活性剂(Surfactant,SF)为单甘脂、聚甘油脂肪酸酯、卵磷脂所组成的混合表面活性剂,助表面活性剂(Cosurfactant,CoSF)为食品级甘油。SF与CoSF的质量比K_m=1:1,SF:CoSF:OiL=4:4:5,即处方组成:混合表面活性剂为4%、甘油为4%、翅果油5%、蒸馏水为76%,山梨酸钾为1%,蔗糖为10%。制备工艺为:混合表面活性剂溶解于翅果油中,70℃水浴加热,作为油相(O相),甘油溶解于蒸馏水中,70℃水浴加热,作为水相(W相)。将W相缓缓加入至O相中,70℃水浴加热,保持两相温度相同,边加热边持续搅拌50 min,磁力搅拌速度为1500~2000 r/min,直至混合均匀,得到均一稳定的乳白色初乳。利用高压均质机对初乳进行均质,均质条件为600bar均质压力下均质6次,得最终的亚微乳制剂。(2)所制备的翅果油亚微乳,外观为均一的乳白色液体,粒径分布在100~1000 nm之间,平均密度值为0.9702~0.9735 g/cm~3;pH为5.3~5.5;ζ电位为-40~-50 mv;4000 r/min离心15 min后不分层。GC法建立翅果油亚微乳中亚油酸的含量测定方法,其亚油酸的线性范围为0.0506~1.012 mg/m L,检测限23.7μg/m L(S/N=3),定量限79.2μg/m L(S/N=10),日内精密度的RSD值为0.47%~1.74%,日间精密度为0.33%~1.23%,重复性试验的RSD值为1.32%,回收率在98.4%~102.1%之间,平均回收率为100.1%,RSD值为1.07%,GC法测定各批次自制翅果油亚微乳中亚油酸的含量为9.87~10.18 mg/mL,每批次之间的RSD值为0.96%~1.62%;采用HPLC法建立翅果油亚微乳中亚油酸的含量测定方法,其亚油酸的线性范围0.0506~1.012 mg/mL,检测限为6.325μg/mL(S/N=3),定量限为21.08μg/m L(S/N=10),日内精密度的RSD值为0.38%~0.6%,日间精密度为0.98%~1.54%,重复性试验的RSD值为1.01%,回收率在98.2%~102.4%之间,平均回收率为100.4%,RSD值为1.43%,HPLC法测定各批次自制翅果油亚微乳的亚油酸的含量为9.91~10.21 mg/mL,每批次之间的RSD值为1.15%~1.34%。稳定性试验结果:影响因素试验表明,翅果油亚微乳在高温条件(60℃)下,第10天时离心试验测定分层,且K_e值较大外,其他指标均无明显变化;在低温、光照下各组分包括外观,各质量评价指标及亚油酸含量测定均无明显变化;加速试验结果:在40℃条件下,2个月时离心试验测定分层,且K_e值较大;30℃条件下考察至今,各指标均无明显变化;长期稳定性试验结果:各指标均无明显变化。(3)与阴性对照组相比,翅果油中剂量组可显著延长小鼠的负重游泳时间(P0.05);高、低剂量组小鼠负重游泳时间无统计学差异(P0.05);制剂组与阴性对照组比较,结果虽不具统计学意义,但均略高于低、高剂量组和阴性对照组;翅果油中剂量组三项生化指标测定结果,包括肝糖原储备量及回复率、血乳酸和血清尿素氮的含量及清除率与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。高、低剂量组与对照组比较,无统计学差异(P0.05);制剂组各项指标均优于翅果油低、高剂量组和阴性对照组。结论:本文从处方筛选、制备工艺考察、质量评价、缓解运动性疲劳及其机制研究等方面进行探讨,成功制备了翅果油亚微乳。该制剂具有掩盖油相的滋腻气味及改善口感、提高其生物利用度、促进人体吸收等优势。各项指标均符合GB2760-2014《食品安全国家标准、食品添加剂使用标准》,及2015版《中国药典》第四部“原料药与药物制剂稳定性试验指导原则”和2003版《保健食品检验与评价技术规范》项下操作的有关规定。该制剂是一种生物相容性好、稳定性高,安全性好,具有缓解运动性疲劳的新型口服制剂。具有一定的研究价值与市场应用前景。
【图文】：

高压均质,均质压力,次数

山西医科大学硕士学位论文由表 1-16 极差分析可知，各因素对翅果油亚微乳制备的影响大小顺B>C>D>A；即影响因素依次为：搅拌速度>温度>乳化方法>搅拌时间，亚微乳最优制备工艺为 A3B2C3D1：即在 70℃水浴温度下，采用干胶1500r/min，磁力搅拌 50min。2.5.2 高压均质的工艺优化均质压力，均质次数对翅果油亚微乳制备工艺的影响结果见下图：

溶性,染料,苏丹红,亚甲蓝

图 2-1 翅果油亚微乳样品图类型：试管鉴定法——试验结果表明翅果油亚微乳在非水溶性染料苏丹红中几不扩散，在水溶性染料亚甲蓝中扩散迅速，表明该翅果油亚微乳为 O/W 型亚乳。光学显微镜法——观察结果显示，所制备制剂在非水溶性染料苏丹红中相被染成红色，而外相未被染色。在水溶性染料亚甲蓝中，，内相未被染色，而相被染成蓝色。亚微乳在两种染料中的染色结果均显示为 O/W 型亚微乳。结如图 2-2 所示。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R943;R96

【参考文献】