BBI阻断LPS对肠上皮细胞炎症因子和紧密连接蛋白的调节作用

发布时间：2020-05-20 00:26

【摘要】：目的BBI是大豆等豆类作物含有的成分,已知有良好的耐酸耐分解性质,具有抗炎抗HIV功能。慢性系统性炎症是HIV感染进展的主要因素之一。尽管抗逆转录治疗(ART)能有效地抑制HIV复制,但患者体内系统性炎症仍然存在。由于黏膜内有大量免疫激活的CD4+T细胞和巨噬细胞,肠道是HIV进入体内后首先攻击的主要部位之一。HIV感染造成CD4+T细胞死亡,使肠道免疫功能下降,细菌得以大量繁殖,产生细菌内毒素如LPS,后者进入体液循环(LPS易位),造成系统性炎症和免疫激活,因此肠道微生物及其产物LPS易位是HIV慢性进展的重要标志。本研究的主要目的如下:,1、BBI能否抑制细菌内毒素(LPS)诱导的肠上皮细胞炎症因子表达;2、BBI能否阻断LPS对肠上皮细胞间紧密连接蛋白的下调作用;3、BBI能否抑制LPS诱导的肠上皮细胞内ROS的表产生;4、BBI抑制LPS作用的机制。方法用肠上皮细胞(HT-29细胞)作为研究的模式细胞,研究以下内容:1、检测BBI和/或LPS对HT-29细胞的毒性作用;2、用实时荧光定量PCR及Western Blot检测LPS对肠上皮细胞炎症因子(TNF-α,IL-1β,IL-8 和 MCP-1)、TLR-4、MyDD8、细胞间紧密连接蛋白(ZO-1 和 Occludin)的表达影响;3、用实时荧光定量PCR及Western Blot检测BBI拮抗LPS诱导炎症因子的作用及机制;4、Western Blot和NF-κB-luci系统检测BBI和/或LPS对HT-29细胞内NF-κB活化的影响;5、用DCFH-DA探针检测BBI和/或LPS对HT-29细胞内ROS的影响。结果1、实验所用BBI浓度(最高1000μg/ml)和LPS浓度(最高1000ng/ml)对HT-29细胞无毒性;2、LPS诱导HT-29细胞产生炎症因子(TNF-α,IL-1β,IL-8,MCP-1)和表达TLR4,而BBI能抑制LPS对炎症因子及TLR4的上调作用;3、LPS抑制HT-29细胞表达紧密连接蛋白;BBI能阻断LPS对HT-29细胞紧密连接蛋白的下调作用;4、BBI能拮抗LPS对HT-29细胞内ROS的诱导作用;5、LPS能促进HT-29细胞内NF-κB的磷酸化,而BBI能阻断LPS对NF-κB的磷酸化作用。结论通过拮抗LPS对肠上皮细胞内NF-κB的活化及TLR4表达的促进作用,BBI能抑制LPS诱导的炎症因子和ROS的表达,此外,BBI能阻断LPS对肠上皮细胞紧密连接蛋白的下调作用。这些结果表明,BBI具有拮抗细菌内毒素LPS的功效,有必要进行进一步体内实验,研究BBI是否可用于治疗HIV感染造成的慢性系统性炎症和免疫激活。
【图文】：

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逦Ｓｉｔｅ逦Ｓｉｔｅ逡逑图１．１邋ＢＢ丨结构图。（参考Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司丫ｆ邋７／Ｎ站ＢＢＩ说明｜５）逡逑１．１．２邋ＢＢ直抗ＨＩＶ感染研宄逡逑天然产物抗ＨＩＶ作用方式有：直接针对ＨＩＶ，抑制ＨＩＶ逆转录酶活性；直接阻逡逑断ＨＩＶ接触靶细胞；对包括ＨＩＶ靶细胞在内的机体免疫细胞及非免疫细胞的天然免逡逑疫进行调节。目前有关ＢＢＩ抑制ＨＩＶ的研究有两种：一是非细胞体系中研究ＢＢＩ对逡逑ＨＩＶ逆转录酶活性的影响；二是ＢＢＩ能激活ＨＩＶ靶细胞一巨噬细胞天然免疫并抑制逡逑ＨＩＶ复制。非细胞体系中抑制ＨＩＶ逆转录酶活性研究显示，浓度较高时ＢＢＩ才能有逡逑１逡逑
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R96

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本文编号：2671719