辣椒素对大鼠体内氯氮平药代动力学的影响研究

发布时间：2020-05-20 19:08

【摘要】：研究背景氯氮平(clozapine,CLZ)是临床上应用广泛的非典型抗精神病药物之一,通过细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)酶系统催化代谢,其中CYP1A2催化氯氮平生成去甲氯氮平(N-desmethylclozapine,N-CZP)是主要的代谢途径。与氯氮平相关的药物相互作用机制主要是CYP1A2的诱导或抑制作用。研究报道氟伏沙明对CYP1A2抑制作用最强,可作为研究CYP1A2的工具药。辣椒是全世界范围内被广泛喜爱的食品和调味品之一,其主要的辛辣成分是辣椒素(capsaicin,CAP),由于具有多种药理作用而在不同的领域被广泛应用[1]。随着辣椒素的临床研究不断深入,辣椒素与药物相互作用问题日益凸现。刘金梅[2]等人研究证明辣椒素可能有诱导大鼠肝药酶CYP1A2、CYP2C11和CYP3A活性,增强肝脏代谢能力的作用,但也有文献报道[3]辣椒素在体外对大鼠肝微粒CYP1A2、CYP2C11、CYP2E1和CYP3A2具有抑制作用。研究显示,辣椒素对多种药物代谢酶和转运体有显著的诱导或抑制作用,通过多种因素影响合用药物的体内过程,进而导致复杂的药物相互作用的发生。患者在服用氯氮平时,摄入辣椒素是否会对药物的药代动力学有影响?相互作用的机制是否由于辣椒素对CYP1A2的抑制作用?然而,目前关于体内辣椒素-药物相互作用的研究报道不多,辣椒素对氯氮平药代动力学的影响研究尚未见报道。研究辣椒素对CYP450酶活性的影响,以及辣椒素对氯氮平药代动力学的机制,对于揭示辣椒素与其他药物间相互作用具有非常重要的意义。研究目的本项目拟通过建立HPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中氯氮平及代谢物的浓度,研究不同剂量辣椒素对大鼠体内氯氮平药代动力学特征,并考察辣椒素对CYP1A2的影响,旨在为氯氮平或辣椒素与其他的药物-食物相互作用研究以及临床合理用药提供理论参考。研究方法1.建立大鼠血浆中氯氮平以及去甲氯氮平浓度的HPLC-MS/MS方法。2.按自身对照、双周期方法设计。采用雄性SD大鼠为动物模型,随机分为4组,每组10只:低剂量辣椒素组、中剂量辣椒素组、高剂量辣椒素组和对照组。每组第一周期在大鼠禁食12 h后,予氯氮平混悬液(31.5 mg·m L-1)灌胃,整个实验的给药剂量均按大鼠体重1 m L/100g给予。经眼眶静脉丛采集给药前(0 h)及给药后0.17、0.33、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12 h血样1 m L/次待测。经过7 d的清洗期后,第二周期将各组大鼠连续7 d分别给予低(0.2 mg·m L-1)、中(0.8 mg·m L-1)、高浓度(1.6 mg·m L-1)辣椒素混悬液或氟伏沙明(10 mg·m L-1)溶液灌胃,于第8 d分别灌胃含相应浓度辣椒素或氟伏沙明与氯氮平的混合混悬液,同第一周期灌胃后经眼框静脉丛分别采集不同时间点血样,采用HPLC-MS/MS法同时检测氯氮平和去甲氯氮平的血药浓度,并采用DAS 3.2.4软件计算主要药代动力学参数,采用SPSS19.0进行统计分析。结果1.HPLC-MS/MS法测定大鼠体内氯氮平与去甲氯氮平标准曲线的线性范围为1-1000 ng·m L-1,定量下限为1 ng·m L-1,实验结果满足药代动力学相关指导原则对测定的要求,适用于大鼠体内氯氮平及去甲氯氮平药代动力学研究。2.不同剂量辣椒素组中,自身第二周期与第一周期比较,氯氮平及去甲氯氮平的药-时曲线和主要药动学参数有着不同的变化:低剂量辣椒素组中,合用低剂量辣椒素后氯氮平的t1/2显著延长(p0.05)。氯氮平及去甲氯氮平的Cmax、AUC、Vd及CL等参数差异均无统计学意义(p0.05)。中剂量辣椒素组中,合用中剂量辣椒素后氯氮平及去甲氯氮平的Cmax和AUC0-12均有增加的趋势。其中Cmax分别增加1.73倍和1.68倍(p0.05);AUC0-12分别增加1.19倍和1.54倍。去甲氯氮平的tmax和t1/2延长,CL/F和Vd/F降低(p0.05)。高剂量辣椒素组中,合用高剂量辣椒素后氯氮平及去甲氯氮平的Cmax和AUC0-12显著增加(p0.05),t1/2延长,CL/F和Vd/F明显降低。氯氮平及去甲氯氮平的Cmax分别增加1.92倍和1.78倍;AUC0-12分别增加2.05倍和1.98倍。3.对照组中,合用氟伏沙明后使氯氮平的CL/F和Vd/F均有减少趋势,Cmax、AUC0-12分别增加1.38和2.12倍。去甲氯氮平tmax减少,t1/2增加(p0.05)。4.在第二周期中,中、高剂量辣椒素组与对照组(氟伏沙明)比较,氯氮平的平均血药浓度-时间曲线的变化趋势基本一致,代谢物去甲氯氮平与原形药物氯氮平浓度的比值也比较接近。结论1.本实验建立了一种快速、高效、简单、可靠的高效液相串联质谱法(HPLC-MS/MS),并可用于同时检测大鼠体内氯氮平及去甲氯氮平血药浓度研究。2.辣椒素对大鼠体内氯氮平药代动力学的影响与剂量有关。合用低剂量辣椒素对氯氮平的吸收、分布等过程无显著影响。合用中、高剂量辣椒素后,氯氮平在吸收相和平衡相的药时曲线下面积和峰浓度均显著增加,总清除率显著减小,同时去甲氯氮平体内暴露量也有明显增加的趋势。3.合用中、高剂量辣椒素与合用氟伏沙明比较,氯氮平的平均血药浓度-时间曲线的变化趋势基本一致,代谢物去甲氯氮平与原形药物氯氮平浓度的比值也比较接近。提示中、高剂量辣椒素对氯氮平主要代谢酶活性的影响可能与氟伏沙明对CYP1A2的影响作用相当。而辣椒素对CYP1A2的作用还需进一步深入研究。4.本实验推测辣椒素和氯氮平之间的食物-药物相互作用可能主要是由于辣椒素能促进氯氮平的吸收,提高了生物利用度;而辣椒素对氯氮平代谢过程的机制还尚难以明确。提示氯氮平临床应用中,应当注意饮食含辣椒素餐食时可能会影响疗效或药物不良反应,并应密切监测氯氮平的血药浓度。
【图文】：

扫描图,氯氮平,去甲氯氮平,质谱

2.1 色谱条件色谱柱：美国 Agilent Eclipse plus C18（4.6 mm×100 mm，5 μm）；甲醇-水（75:25v/v，含 5 mmoL·L-1甲酸铵和 0.1%甲酸）流速：0.5 mL·min-1；柱温：35 ℃；进样体积：5 μL。2.2 质谱条件质谱条件：电喷雾电离源（ESI），正离子化，毛细管电压 4000 V，喷雾气压力 45 PSI，干燥气体流速 10 L·min-1，干燥气体温度 350 ℃。扫描方式为选择性离子监测，氯氮平 m/z 327.05→269.80，N-去甲基氯氮平 m/z 313.05→191.75碰撞能量 14 eV，裂解电压 105 eV，四级杆捕捉时间 0.2 s；内标氯氮平-d8 m335.05→274.85，碰撞能量 14 eV，裂解电压 105 eV，四级杆捕捉时间 0.2 s。见图 1。

曲线,氯氮平,工作液,制备方法

辣椒素对大鼠体内氯氮平药代动力学的影响研究.3 标准溶液的配制.3.1 氯氮平及 N-去甲氯氮平分别称取氯氮平、N-去甲氯氮平适量（双份，1 份用于配制标准用于配制质控），用电子微量移液器吸取适量甲醇溶解，即配制g·mL-1的氯氮平和 N-去甲氯氮平溶液，再用 50 %甲醇分别稀释成相曲线及质控（QC）工作液（另一份），制备过程见图 2 和图 3。甲氯氮平工作液各浓度 1:1 混合，得到混合液，混合标准曲线工作液浓，10，40，，70，100 μg·mL-1；混合 QC 工作液浓度为 0.4，20，80
【学位授予单位】：广州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R965

【参考文献】