培美曲塞衍生物A12抗人肺癌A549细胞活性研究

发布时间：2020-05-23 04:44

【摘要】：背景:在恶性肿瘤中,肺癌是危害人类生命健康的常见癌症之一,特别是在我国,其患病率、致死率均处于第一的位置。肺癌的治疗除外科手术方式外,常采用化学治疗的方式。用于临床治疗肺癌的药物中,培美曲塞(Pemetrexed,PMX)常用于二线治疗及与其他抗癌药联合用于一线治疗,具有良好的效果。但国内PMX的生产存在纯度不高等问题,且越来越多的不良反应被逐渐发现,对其结构进行改造,以减少不良反应的发生逐渐成为此类药物研究新的方向。目的:探讨PMX新型衍生物体内外对人肺癌细胞的抑制效果及其机理,以期发现疗效较好的化合物进行后续研究。方法:本研究选取12种PMX新型衍生物(A1-A12)及4株人肺癌细胞(H322细胞、H1299细胞、A549细胞、SPC-A1细胞),首先采用MTT比色法进行体外抗肺癌活性筛选试验,得到活性较好的1种衍生物及1株细胞株,并检测该衍生物对该细胞株在不同作用时间及不同作用浓度条件下的抑制效果,同时进行细胞状态观察。随后进行体内抗肺癌活性研究,选用BALB/c Nude裸鼠(SPF级)作为实验动物,肿瘤细胞体外培养扩增至所需浓度后接种至裸鼠右侧腋下,每只裸鼠接种瘤细胞数1×10~6个。试验设置3组,每组6只裸鼠,分别为(1)模型对照组,给0.9%氯化钠注射液;(2)PMX对照组,给PMX(120 mg/Kg);(3)供试品组,给衍生物(120 mg/Kg),3组给药方式均为尾静脉注射,每2 d给药1次。每组给药体积为0.1 mL/10g,试验持续21 d,每次给药后观察裸鼠状态,每3 d测量移植瘤长宽并称量摄食量及体重。给药结束后处死裸鼠,剖出肿瘤称重并计算肿瘤抑制率。最后进行抗肺癌细胞机制研究,主要研究衍生物对肺癌细胞的迁移活性(包括垂直迁移活性及水平迁移活性)、细胞周期、细胞凋亡的影响,分别采用Transwell试验、划痕愈合试验、PI单染试验、Annexin V-FITC/PI双染试验进行研究。结果:(1)MTT试验初筛结果表明虽然是同为PMX的衍生物,但各自对肿瘤细胞株的影响效果存在显著地不同,同一种细胞株对不同的衍生物敏感性也不同,其中化合物A12对A549细胞的抑制效果最为显著,IC_(50)为1.26±0.15μmol/L,且重复性较好。由此筛选得到化合物A12及A549细胞进行进一步不同作用时间MTT试验及细胞形态学观察。结果发现随着作用时间的增加和作用浓度的提高,A549细胞的存活率逐渐降低,且发现A12能够影响A549细胞的细胞形态,使细胞发生形态改变、皱缩。(2)体内试验证实:至观测终点,与模型对照组相比较,PMX对裸鼠行为、活动、体重及摄食量无明显影响,而给予PMX的裸鼠,存在摄食量减少的现象。在对肿瘤的抑制方面,给予A12的裸鼠的肿瘤抑制率为41.73%,优于PMX对照组(32.77%)。表明供试品即化合物A12能够抑制人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长(P0.01),且相同给药剂量条件下,A12的抑瘤效果优于PMX,不良反应方面的表现也优于PMX。(3)Transwell试验结果显示经A12作用8 h后,迁移至Transwell小室膜底部的A549细胞数较少,化合物A12对A549细胞具备明显的抑制迁移活性(P0.01),并且此种活性对浓度具有依赖性,此结果通过划痕愈合试验进一步证实;PI染色试验结果发现A12能够显著升高G2/M期细胞的百分率(P0.01),即将A549细胞阻滞于G2/M期,使其无法进入G0期及下一个复制周期,进而无法执行其生物学功能;Annexin V-FITC/PI双染试验结果发现A12能够显著提高A549细胞的早期凋亡率(P0.05)、晚期凋亡坏死率(P0.01)及总凋亡率(P0.05)。结论:本研究前期通过筛选得到了PMX新型衍生物A12,发现其对人肺癌A549细胞具有良好的体外抑制活性,并通过裸鼠A549细胞移植瘤模型,证实其亦能抑制A549细胞的体内增殖。其发挥作用的机制与其影响A549细胞的迁移、细胞周期及细胞凋亡进程有关。
【图文】：

作用时间,细胞毒性,状态,衍生物

图 2.3.2 化合物 A12 对 A549 细胞状态影响结果（100×）物 A12 不同作用时间对 A549 细胞毒性结果法初筛结果得到的 PMX 衍生物 A12 进行不同作用时间（8 h、24 h、

裸鼠,体重,增长趋势,化合物

2化合物A12对荷瘤裸鼠摄食量的影响
【学位授予单位】：济南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R96

【参考文献】