匹莫齐特抑制乳腺癌细胞增殖的作用机制研究

发布时间：2020-05-26 20:14

【摘要】：作为抗精神病药物,匹莫齐特已被证实可抑制多种癌症。以往的研究表明,匹莫齐特可以抑制乳腺癌细胞的增殖。然而,尚未有研究表明匹莫齐特可能通过RAF/ERK信号通路抑制乳腺癌细胞增殖及其对乳腺癌细胞自噬的影响。目的:确定匹莫齐特是否通过RAF/ERK途径发挥抗癌活性,并研究其是否通过诱导自噬进而促进乳腺癌细胞的凋亡。方法:通过UALCAN和Kaplan-Meier数据库筛选与乳腺癌预后相关的基因,并且利用Schrodinger软件对接匹莫齐特与选定基因。通过4,5-二甲基噻唑-2-基-3,5-二苯基甲嗪(MTT)活力测定、克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验和transwell侵袭实验检测了匹莫齐特对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。使用JC-1分析检测匹莫齐特对细胞线粒体膜电位的调节。基于吖啶橙/溴化乙锭(Acridine Orange and Ethidium Bromide,AO-EB)染色鉴定匹莫齐特诱导的凋亡期乳腺癌细胞。透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM)和单丹磺酰尸胺(Monodansylcadaverine,MDC)染色用于观察自噬体。FRET系统检测到匹莫齐特对乳腺癌细胞中环磷酸腺苷(Cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的影响。使用蛋白质印迹法以研究匹莫齐特对乳腺癌细胞凋亡和自噬相关蛋白表达的影响。结果:匹莫齐特可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进乳腺癌细胞线粒体膜电位下降和凋亡。匹莫齐特通过下调RAF1和ERK 1/2的磷酸化抑制细胞增殖,同时诱导抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xl的表达降低,并促进促凋亡蛋白Bax的上调和凋亡启动信号蛋白caspase-9的活化。然而Hippo通路的关键蛋白YAP/TAZ、MST1和MST2不受匹莫齐特的调节。匹莫齐特还通过上调cAMP促进乳腺癌细胞的自噬水平,导致LC3-I向LC3-II的转化增加和P62表达的下调,但mTOR信号传导不参与该过程。氯喹(CQ)阻断乳腺癌细胞中的自噬后,匹莫齐特诱导细胞凋亡的活性降低。结论:这些数据表明匹莫齐特通过调节RAF/ERK信号通路抑制乳腺癌,并依赖于cAMP诱导的自噬促进乳腺癌细胞的凋亡。这些结果表明匹莫齐特可能是治疗乳腺癌的潜在药物。
【学位授予单位】：大连大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R96

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