雷帕霉素对钛颗粒诱导下骨髓间充质干细胞成骨能力的影响

发布时间：2020-05-29 07:46

【摘要】：目的观察雷帕霉素激活自噬对钛颗粒诱导下骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨能力的影响。方法分别以0、1、5、10、20、50、100nM浓度雷帕霉素培养C57小鼠BMSCs细胞48小时,CCK8法检测不同浓度雷帕霉素处理后在各时间点的细胞活力,确定最佳作用时间及浓度;设置对照组,选用最佳浓度的雷帕霉素(10nM)处理骨髓间充质干细胞24小时后western blot法检测自噬相关蛋白Atg5、LC-3Ⅰ/Ⅱ表达水平,确定骨髓间充质干细胞自噬情况;之后实验分为4组:A组:成骨诱导分化培养基,B组:成骨诱导分化培养基+钛颗粒,C组:成骨诱导分化培养基+雷帕霉素,D组:成骨诱导分化培养基+钛颗粒+雷帕霉素。成骨分化培养各组细胞共21天,ALP含量在第7、14、21d时检测,各组的钙沉积用茜素红染色法检测;各组成骨分化相关蛋白Runx2和OCN的表达水平用western blot法检测。结果10nM的雷帕霉素处理C57小鼠BMSCs24h时,细胞活力最佳;以10nM浓度的雷帕霉素处理BMSCs24h后,Atg5、LC3-Ⅰ/Ⅱ表达量较对照组明显增高;B组ALP活性、钙沉积量、Runx2和OCN表达水平较A组明显降低(P0.05),C组ALP活性、钙沉积量、Runx2和OCN表达水平明显高于其余各组(P0.05),而D组ALP活性、钙沉积量、Runx2和OCN表达水平较C组低(P0.05)。结论:钛颗粒抑制骨髓间充质干细胞向成骨分化的能力,而雷帕霉素可有效减轻钛颗粒对BMSCs成骨分化能力抑制,这可能与其增强骨髓间充质干细胞自噬水平有关。
【图文】：

宁夏医科大学硕士学位论文 结结果1.雷帕霉素对 BMSCs 生长的最佳浓度和时间观察为了确定不同浓度雷帕霉素对骨髓间充质干细胞作用的最佳浓度及时间，我们使了 CCK8 法检测细胞活性。加入浓度为 0nM、5nM、10nM、20nM、50nM、100nM 的雷帕素，培养细胞于 12 小时、24 小时、36 小时、48 小时后收集并检测。结果显示，对 小鼠 BMSCs 生长的最佳工作浓度和最佳工作时间分别为 10nM 和 24h，差异有统计学意（P＜0.05），详见图 1。因此我们选择此药物浓度与作用时间处理细胞。

14图 2 雷帕霉素对 BMSCs 自噬相关蛋白 Atg5、LC3-Ⅰ/ⅡA:Western blot 法检测细胞 Atg5 和 LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白表达水平Ⅱ蛋白水平半定量分析。1：对照组；2：雷帕霉素处理组。aPvs 1表 1 Atg5 和 LC3-Ⅰ/Ⅱ在 A 组、B 组中的比3.各组钙沉积量比较A 组 B 组 Atg5 0.3908±0.03574 0.7250±0.02857 LC3-Ⅰ/Ⅱ 0.1816±0.01823 0.3348±0.1964
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R965

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本文编号：2686628