靶向乳腺癌细胞的他莫昔芬纳米粒的制备及体外初步评价

发布时间：2017-03-27 03:06

  本文关键词：靶向乳腺癌细胞的他莫昔芬纳米粒的制备及体外初步评价，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:以壳聚糖(CS)为材料,合成染料木素修饰的壳聚糖衍生物(GEN-CS);以GEN-CS为载体材料,TAM为模型药物,三聚磷酸钠(TPP)为交凝剂,染料木素(GEN)为靶向配基,采用离子交联法构建靶向乳腺癌细胞的TAM纳米粒,进一步评价纳米粒的形态、粒径、Zeta电势、载药量及包封率,体外释放等;激光共聚焦显微镜观察细胞对纳米粒的摄取情况,采用MTT法比较载药纳米粒与游离药物对MCF-7细胞的增殖抑制作用。方法:利用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)催化反应,将GEN与CS通过丁二酸的双羧基进行偶联,得到GEN-CS载体材料,运用红外等技术对它的结构进行确证和表征。GEN修饰的CS分子中未酰化的氨基与离子交凝剂TPP在适宜条件下形成纳米粒,将TAM包载于纳米粒中。用透射电子显微镜(TEM)观察纳米粒形态;用马尔文ZS90粒度仪测其粒径大小和分布、电势;HPLC法测定纳米粒的载药量和包封率;采用恒温水浴振荡法考察纳米粒的体外释药。制备FITC标记的他莫昔芬壳聚糖纳米粒(TAM-CS-NPs)和TAM-GEN-CS-NPs,然后分别作用于MCF-7细胞,用激光共聚焦显微镜观察TAM-CS-NPs和TAM-GEN-CS-NPs在细胞内的摄入与分布。体外培养MCF-7细胞,通过MTT法测定染料木素修饰的壳聚糖纳米粒(GEN-CS-NPs)、TAM溶液、TAM-GEN-CS-NPs纳米粒悬液对细胞的增殖抑制率,并计算当细胞生长抑制率为50%时的所需药物浓度,即IC50值。结果:制备的GEN-CS载体材料中GEN基团的质量百分含量为1.16%,GEN-CS和CS红外谱图对比发现,新增的1600 cm-1、1456 cm-1为苯环的特征吸收峰,1668 cm-1为酰胺I带,这证实CS上成功接枝GEN。透射电子显微镜(TEM)观察纳米粒为圆形或类圆形,平均粒径为299.8 nm,PDI为0.181,Zeta电位为27.6 m V,载药量为14.02,包封率为85.77%,与TAM相比较,TAM-GEN-CS-NPs具有明显的缓释性能。MCF-7细胞与经FITC标记的TAM-CS-NPs和TAM-GEN-CS-NPs,共同孵育4 h(37℃),激光共聚焦显微镜观察证明肿瘤细胞对TAM-GEN-CS-NPs的摄取明显高于CS-NPs。经析因设计资料的方差分析,显示药物因素与浓度因素之间存在交互效应(F=31.04,P=0.000),即不同处理组对肿瘤细胞的细胞增殖抑制率随药物浓度的变化而变化。GEN-CS-NPs对MCF-7细胞有轻微的增殖抑制作用,且随着浓度的增加,抑制作用增强且具有显著性差异(P0.05)。TAM、TAM-GEN-CS-NPs对MCF-7细胞均有抑制作用,且随着浓度的升高而增强;相同药物的浓度,作用相同的时间,TAM-GEN-CS-NPs对MCF-7细胞增殖抑制作用最强,GEN-CS-NPs最弱,具有显著性差异(P0.05)。TAM、TAM-GEN-CS-NPs的IC50分别为18.21μmol/L、12.82μmol/L。结论:以GEN-CS为载体,采用离子交联法制备的TAM-GEN-CS-NPs形状为类圆形或圆形、粒度分布均匀、具有较高载药量和较好缓释性能;激光共聚焦观察结果初步显示,TAM-GEN-CS-NPs对MCF-7细胞具有靶向性;MTT结果显示TAM-GEN-CS-NPs对MCF-7细胞增殖抑制作用强,故TAM-GEN-CS-NPs有望成为一种潜在的乳腺癌靶向性药物载体。
【关键词】：染料木素 壳聚糖 他莫昔芬 纳米粒 人乳腺癌MCF-7细胞
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R943
【目录】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-15
• 第一部分 药物含量测定方法的建立15-27
• 1 材料与方法15-19
• 1.1 材料15
• 1.2 实验方法15-19
• 2 结果19-25
• 2.1 紫外分光光度法测定GEN-CS中GEN含量19-21
• 2.2 高效液相色谱法测定TAM-GEN-CS-NPs的药物含量21-25
• 3 讨论25-26
• 3.1 紫外分光光度法测定GEN-CS中染料木素含量25
• 3.2 高效液相色谱法测定载他莫昔芬染料木素修饰壳聚糖纳米粒的药物含量25-26
• 4 结论26-27
• 4.1 紫外分光光度法测定GEN-CS中染料木素含量26
• 4.2 高效液相色谱法测定载他莫昔芬染料木素修饰壳聚糖纳米粒的药物含量26
• 4.3 载他莫昔芬染料木素修饰壳聚糖纳米粒的载药量和包封率测定方法26-27
• 第二部分 染料木素修饰的壳聚糖的合成方法Ⅰ27-41
• 1 材料与方法27-32
• 1.1 材料27
• 1.2 方法27-32
• 2 结果32-39
• 2.1 紫外分光光度法测定N-琥珀酰壳聚糖氨基取代度32-35
• 2.2 NSCS合成的影响因素考察实验结果35-37
• 2.3 合成方法Ⅰ合成的染料木素修饰的壳聚糖37-39
• 3 讨论39-40
• 3.1 氨基与茚三酮的反应39
• 3.2 GEN-CS的合成39-40
• 4 结论40-41
• 4.1 氨基与茚三酮的反应的最佳条件40
• 4.2 合成的GEN-CS40-41
• 第三部分 染料木素修饰的壳聚糖的合成方法Ⅱ41-53
• 1 材料与方法41-45
• 1.1 材料41
• 1.2 方法41-45
• 2 结果45-51
• 2.1 染料木素琥珀酸酯的合成45-47
• 2.2 GEN-CS的合成47-49
• 2.3 GEN-CS的红外（IR）扫描图谱49-51
• 3 讨论51-52
• 3.1 GEN-CS的合成51-52
• 4 结论52-53
• 4.1 GEN-CS的合成52-53
• 第四部分 载他莫昔芬染料木素修饰的壳聚糖纳米粒的制备及表征53-63
• 1 材料与方法53-56
• 1.1 材料53
• 1.2 方法53-56
• 2 结果56-61
• 2.1 影响TAM-GEN-CS-NPs的制备因素的考察56-58
• 2.2 TAM-GEN-CS-NPs的表征58-61
• 3 讨论61-62
• 3.1 TAM-GEN-CS-NPs的制备61
• 3.2 TAM-GEN-CS-NPs体外释药61-62
• 4 结论62-63
• 4.1 TAM-GEN-CS-NPs的制备处方62
• 4.2 TAM-GEN-CS-NPs体外释药62-63
• 第五部分载他莫昔芬染料木素修饰的壳聚糖纳米粒的体外初步评价63-72
• 1 材料与方法63-66
• 1.1 材料63-64
• 1.2 方法64-66
• 2 结果66-70
• 2.1 TAM-GEN-CS-NPs的细胞摄取试验66
• 2.2 TAM-GEN-CS-NPs对乳腺癌细胞的增值抑制率试验66-70
• 3 讨论70-71
• 3.1 TAM-GEN-CS-NPs的细胞摄取试验70
• 3.2 TAM-GEN-CS-NPs对乳腺癌细胞的增值抑制率试验70-71
• 4 结论71-72
• 4.1 TAM-GEN-CS-NPs的细胞摄取71
• 4.2 TAM-GEN-CS-NPs对乳腺癌细胞的增值抑制率试验71-72
• 参考文献72-75
• 综述75-86
• 参考文献83-86
• 致谢86-87
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果87-88
• 个人简历88

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 莫志强;涂刚;罗浩军;李振华;杨光伦;;人乳腺癌MCF-7他莫昔芬耐药细胞株的建立及鉴定[J];第三军医大学学报;2011年21期

2 陈红丽;唐红波;杨文智;陈汉;王银松;梅林;张彤;熊青青;张其清;;生物素化壳聚糖修饰的PLGA纳米粒的制备及表征[J];高等学校化学学报;2010年08期

3 赵阳;蒋淑琴;张秀荣;;壳聚糖作为靶向制剂载体材料的研究进展[J];吉林医药学院学报;2012年01期

4 马杰;房林;;纳米粒子靶向治疗乳腺癌研究进展[J];上海交通大学学报(医学版);2010年03期

5 张丽萍;丁红;谢茵;郭晓玲;;高效液相色谱法测定枸橼酸他莫昔芬凝胶剂的含量[J];中国药物与临床;2009年08期

6 孙川;邢洋;胡华颖;梁云星;范博;梁桂贤;;低分子肝素pH敏感巯基壳聚糖纳米粒的制备及体外黏膜透过性评价[J];中国药学杂志;2014年16期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 罗浩军;乳腺癌CAF中GPER介导的雌激素效应及其在肿瘤他莫昔芬耐受中的作用探讨[D];重庆医科大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 张雅溶;透明质酸靶向姜黄素壳聚糖纳米粒的制备及初步细胞学研究[D];重庆医科大学;2013年

  本文关键词：靶向乳腺癌细胞的他莫昔芬纳米粒的制备及体外初步评价，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：269764