表面修饰透明质酸的PBAE纳米粒携载阿霉素逆转乳腺癌细胞耐药的研究

发布时间：2017-03-27 03:11

  本文关键词：表面修饰透明质酸的PBAE纳米粒携载阿霉素逆转乳腺癌细胞耐药的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的癌症已成为全球首要的疾病死亡原因。化疗是癌症治疗最重要的方法之一,然而,肿瘤细胞对化疗药物容易产生耐药性,往往导致化疗失败。纳米载体技术的发展为克服临床化疗耐药提供了新的研究机遇。本研究构建了一种具有聚氨基酯(PBAE)内核与透明质酸(HA)外壳的纳米载体系统,用于携载化疗药物阿霉素(DOX),以期高效逆转乳腺癌细胞的耐药性。内容本论文的研究内容分为两部分。第一部分包括:纳米载药体系的制备、表征,以及载药与体外释药性能的考察。第二部分包括:纳米载药体系逆转乳腺癌细胞耐药性的体外考察(细胞毒性、细胞凋亡及细胞周期考察)及其逆转机制的初步探讨。方法1.纳米载药体系的制备、表征,以及载药与体外释药性能的考察:采用O/W乳化溶剂挥发法制备PBAE/DOX纳米核,采用荧光分光光度法考察不同PBAE/DOX投料比下DOX的载药量与包封率,评价PBAE纳米核对DOX的携载能力;利用红外(IR)和荧光光谱分析PBAE/DOX中PBAE和DOX分子间的相互作用,并利用透射电镜和电位-粒径仪对其形貌、粒径及其分布进行表征;采用共孵育的方法,通过正负电荷间的相互作用实现HA对PBAE/DOX的表面修饰,制备纳米载药体系HA/PBAE/DOX,探讨不同投料比对其粒径与Zeta电位的影响,并检测HA/PBAE/DOX的形貌、粒径与表面荷电性质;采用动态透析法考察PBAE/DOX与HA/PBAE/DOX在不同p H值释放介质中的体外释药特征。2.HA/PBAE/DOX对乳腺癌细胞耐药性的逆转效应考察:利用CCK-8试剂盒检测游离DOX、PBAE/DOX和HA/PBAE/DOX对正常乳腺癌细胞株MCF-7与耐药乳腺癌细胞株MCF-7/ADR的细胞毒性,计算半数抑制浓度(IC50);通过流式细胞术分析游离DOX、PBAE/DOX和HA/PBAE/DOX对MCF-7/ADR细胞凋亡的诱导作用以及对细胞周期的影响,综合评价HA/PBAE/DOX对MCF-7/ADR细胞耐药性的逆转效应。3.耐药性的逆转机制探讨:采用流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测HA/PBAE/DOX在MCF-7/ADR细胞中的蓄积情况及分布;通过竞争实验考察游离HA对HA/PBAE/DOX入胞的影响,初步探讨HA/PBAE/DOX对MCF-7/ADR细胞耐药性的逆转机制。结果1.成功构建纳米载药体系HA/PBAE/DOX,呈规则球状形态,具有经典的核-壳结构;当HA/PBAE/DOX投料质量比为15/10/3时,纳米载药体系的平均粒径为185.0 nm,Zeta电位为-29.3 m V;DOX通过疏水作用力和氢键作用高效包载于PBAE纳米核,DOX载药量约为7.5%。2.体外释放实验结果显示,随着释放介质pH的降低,纳米载药体系PBAE/DOX和HA/PBAE/DOX中DOX的释放速率逐渐增加,呈现显著的pH-敏感药物释放特性。3.在耐药乳腺癌MCF-7/ADR细胞中,PBAE/DOX与HA/PBAE/DOX均表现出显著强于游离DOX的细胞毒性;相比于PBAE/DOX,HA/PBAE/DOX对MCF-7/ADR细胞表现出一定的选择性,能显著诱导MCF-7/ADR细胞凋亡,并阻滞细胞周期于S期(DNA合成期),说明HA/PBAE/DOX具有逆转乳腺癌细胞耐药性的作用。4.HA/PBAE/DOX能够高效携载DOX进入耐药乳腺癌MCF-7/ADR细胞,并且其入胞作用能被游离HA显著抑制,说明HA/PBAE/DOX可以通过黏附因子CD44介导的胞吞途径进入MCF-7/ADR细胞,从而逃逸细胞表面过表达的P-糖蛋白(P-gp)的外排作用,逆转细胞耐药。结论本研究成功制备了纳米载药体系HA/PBAE/DOX,具有经典的核-壳结构,呈现明显的p H-敏感药物释放特性;能够显著逆转乳腺癌MCF-7/ADR细胞的耐药性,逆转机制与其通过CD44介导的胞吞途径入胞,逃逸P-gp的外排作用相关。因此,该纳米载药体系有望用于临床耐药乳腺癌的治疗。
【关键词】：透明质酸 PBAE纳米 阿霉素 肿瘤耐药
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R943
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语/符号说明11-12
• 前言12-15
• 研究现状、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、PBAE/DOX和HA/PBAE/DOX纳米粒的制备及表征15-25
• 1.1 对象和方法15-17
• 1.1.1 材料与仪器15
• 1.1.2 实验方法15-17
• 1.2 结果17-22
• 1.2.1 PBAE/DOX与HA/PBAE/DOX纳米粒的制备17-18
• 1.2.2 PBAE/DOX纳米粒的表征以及PBAE与DOX分子间作用力的探讨18-20
• 1.2.3 HA/PBAE/DOX纳米粒的表征20-21
• 1.2.4 PBAE/DOX和HA/PBAE/DOX纳米粒的体外药物释放性质考察21-22
• 1.3 讨论22-24
• 1.3.1 PBAE/DOX和HA/PBAE/DOX纳米粒的制备22-23
• 1.3.2 PBAE/DOX 纳米粒的表征，以及 PBAE 与 DOX 分子间的相互作用力23
• 1.3.3 PBAE/DOX 与 HA/PBAE/DOX 纳米粒的体外释药性质23-24
• 1.4 小结24-25
• 二、载药 HA/PBAE/DOX 纳米粒逆转乳腺癌细胞耐药性的体外考察及其逆转机制的初步探讨25-40
• 2.1 对象和方法25-29
• 2.1.1 材料与仪器25
• 2.1.2 细胞基本培养技术25-26
• 2.1.3 实验方法26-29
• 2.1.4 统计学分析29
• 2.2 结果29-36
• 2.2.1 P-gp在乳腺癌MCF-7 和MCF-7/ADR细胞中的表达29
• 2.2.2 CD44在MCF-7 和MCF-7/ADR细胞中的表达29-30
• 2.2.3 HA/PBAE/DOX纳米粒逆转MCF-7/ADR细胞耐药性的作用评价30-31
• 2.2.4 HA/PBAE/DOX纳米粒对MCF-7/ADR细胞凋亡和周期的影响31-33
• 2.2.5 HA/PBAE/DOX纳米粒进入MCF-7/ADR细胞的机制探讨33-34
• 2.2.6 HA/PBAE/DOX纳米粒入胞机制34-36
• 2.3 讨论36-39
• 2.3.1 P-gp与CD44在MCF-7 和MCF-7/ADR细胞中的表达36
• 2.3.2 HA/PBAE/DOX纳米粒的体外细胞毒性36-37
• 2.3.3 HA/PBAE/DOX纳米粒对MCF-7/ADR细胞凋亡和周期的影响37-38
• 2.3.4 HA/PBAE/DOX纳米粒进入MCF-7/ADR细胞的入胞机制探讨38
• 2.3.5 HA/PBAE/DOX纳米粒逆转MCF-7/ADR细胞耐药性的机制38-39
• 2.4 小结39-40
• 全文结论40-41
• 参考文献41-46
• 发表论文和参加科研情况说明46-47
• 综述 用于癌症治疗的基于透明质酸的载药体系的研究进展47-69
• 综述参考文献62-69
• 致谢69-70
• 个人简历70

  本文关键词：表面修饰透明质酸的PBAE纳米粒携载阿霉素逆转乳腺癌细胞耐药的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：269785