ERS介导的砷致肝细胞凋亡过程中组蛋白H3K4甲基化作用机制的研究

发布时间：2020-06-09 22:34

【摘要】：目的:研究砷中毒诱导人正常肝细胞凋亡过程中H3K4甲基化水平的改变,及其可能调节内质网应激PERK信号通路促进凋亡的机制。方法:根据不同浓度染砷24h后的细胞形态变化,选择100μmol/L亚砷酸钠浓度处理LO2细胞24h复制砷中毒肝细胞损伤模型。把人肝细胞LO2分为对照组、模型组、SET7/9(SET domain containing 7/9)siRNA组、SET7/9siRNA阴性转染组(Negative siRNA)、LSD1(赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1)过表达组、LSD1过表达阴性转染组(Negative shRNA)、LSD1抑制剂组(OG-L002)。采用多功能实时无标记细胞分析仪(real time cellular analysis,RTCA)检测各组细胞增殖的影响;用流式细胞术检测各组细胞周期及凋亡变化;使用Western blot方法观察对照组、模型组、Negative siRNA转染组、SET7/9 siRNA转染组,GRP78、PERK、p-PERK、p-eIF2α(Ser51)、CHOP、H3K4me、SET7/9表达水平的变化;使用Western blot方法观察对照组、模型组、Negative shRNA转染组、LSD1组、OG-L002组GRP78、CHOP、H3K4me、H3K4me2、LSD1表达水平的变化;结果:RTCA结果显示,模型组较对照组细胞增殖明显受抑制,SET7/9 siRNA转染组较Negative siRNA转染组细胞增殖受抑制程度有明显减轻,LSD1组较Negative shRNA转染组和OG-L002组细胞增殖受抑制程度有明显减轻;流式细胞仪检测结果显示模型组与对照组相比细胞凋亡率明显增加,SET7/9 siRNA转染组与Negative siRNA转染组相比细胞凋亡率明显降低,LSD1组与Negative shRNA转染组相比细胞凋亡率明显降低,OG-L002组与Negative shRNA转染组相比细胞凋亡率明显升高;Western Blotting检测发现,GRP78、p-PERK、p-eIF2α(Ser51)、CHOP、H3K4me的表达水平,模型组与对照组相比明显升高,SET7/9 siRNA转染组与Negative siRNA转染组相比明显降低;GRP78、CHOP、H3K4me、H3K4me2表达水平,LSD1组与Negative shRNA转染组相比明显降低,OG-L002组与LSD1组和Negative shRNA转染组相比明显升高。结论:砷染毒可以诱导LO2细胞发生凋亡;砷染毒诱导LO2细胞发生凋亡过程与激活内质网应激的PERK信号通路有关;H3K4甲基化水平的变化可调节PERK信号通路影响砷致肝细胞凋亡。
【图文】：

内质网应激介导的未折叠蛋白响应和凋亡途径[16]

各组细胞的细胞存活率
【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R99

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本文编号：2705351