靶向EGFR喹唑啉类化合物成药性初步研究

发布时间：2020-06-10 21:58

【摘要】：目的与背景:表皮生长因子受体(EGFR)是肿瘤治疗的重要靶点,至吉非替尼上市以来,不断有针对该靶点的小分子抑制剂新药推出。本课题组前期设计合成了靶向EGFR的三种不同结构类型的喹唑啉类化合物,活性研究显示其中的四个化合物(14、16、17、18)具有较强抑制EGFR激酶活性和肿瘤细胞增殖的活性。本文基于课题组前期研究结果,对四个喹唑啉类化合物进行成药性初步研究,为化合物进行相关深入研究提供依据。方法与结果:1、基于前期四个喹唑啉类化合物14、16、17和18的合成路线,从起始原料5-溴-2-氨基苯甲酸开始,通过四步化学反应,对目标化合物进行合成,每步反应条件控制良好,获得四个目标化合物和中间体经1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS进行结构表征。2、化合物14、16、17和18均为碱性化合物。我们在化合物的甲醇溶液中,加入盐酸、氢溴酸、磷酸、柠檬酸和马来酸等五种不同的无机酸和有机酸,制备了 16个相应的盐型化合物。3、采用HPLC对化合物游离碱及其相关盐在人工胃液、人工肠液及生理盐水中的溶解度进行测定。结果表明,化合物14的柠檬酸盐、化合物16的盐酸盐及氢溴酸盐、化合物18的马来酸盐等溶解度明显增加,而化合物17的五个盐溶解度较游离碱均没有显著提高。在人工胃液中,化合物I4柠檬酸盐溶解度为42.65mg/mL,与化合物14(3.26mg/mL)比增加了 13倍;化合物16盐酸盐为195.20mg/mL,化合物 16 氢溴酸盐为 134.95mg/mL,与化合物 I6(16.77mg/mL)相比,溶解度分别增加了 12倍,8倍;化合物18马来酸盐为16.50mg/mL,与化合物18(8.80mg/mL)比,溶解度增加了 1.9倍。4、采用超高效液相色谱法和核磁共振波谱法对四个化合物进行含量测定和相关的含量测定方法学验证研究。建立了超高效液相色谱(UPLC)测定四个化合物的含量的分析条件和定量分析方法。化合物含量测定结果分别是98.79%、97.15%、98.50%、92.14%。选择对苯二酚为内标物,以氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)为溶剂,核磁共振波谱分析(qH-NMR)法测定四个化合物含量,化合物含量分别为96.55%、97.18%、98.42%、91.41%。两种测定化合物含量的方法测得结果一致。5、化合物16及其盐酸盐的小鼠药代动力学进行初步研究。采用UPLC液相方法测定化合物16及其盐酸盐的小鼠血药浓度,实验动物为昆明小鼠。结果表明,灌胃给药化合物16(100mg/kg)与盐酸盐(100mg/kg)小鼠的药代动力学参数如下:tmax 分别为 6.0、0.5h;t1/2 分别为 1.769±0.043、2.019±0.340h;Cmax分别为1.193±0.464、3.297±0.112mg.L-1,(P0.005)。小鼠尾部静脉给药化合物16 盐酸盐(25mg/kg)的药动学参数:tmax为 0.25h;t1/2为 0.623±0.250h;Cmax为5.475±0.524mg.L-1,(P0.005)。化合物16与其盐酸盐小鼠灌胃给药的绝对生物利用度分别为34.32%、59.33%。化合物16盐酸盐的绝对生物利用度较其游离碱相比,增加了 73%。结论:本文对四个喹唑啉类化合物进行了初步成药性评价。放大合成的四个化合物中,14、和17的纯度大于98%;化合物成盐后,溶解度有不同程度的提高,其中16盐酸盐比游离碱提高了 12倍,生物利用度提高了 73%。本文为上述化合物作为候选药物进一步研究提供了实验依据。
【图文】：

溶解度曲线,溶解度曲线,碱性,酸性

酸盐（６．６０ｍｇ／ｍＬ）、丙二酸盐（３．９０ｍｇ／ｍＬ）和马来酸盐（９．８０ｍｇ／ｍＬ）后，逡逑溶解度增加了邋１３到３５倍。这是由于药物盐型在扩散层表面充当自身缓冲液，逡逑通过改变微环境的ｐＨ值来提高其溶解度。根据ｐＨ－溶解度曲线，如图１－５所示，逡逑在小于ｐＨｍａｘ情况下（碱性化合物则大于ｐＨｍａｘ），药物盐型的溶解度远远大于逡逑其游离形式溶解度。逡逑Ｓ＇邋｜ｓＴ＝（ＢＨ％＋［Ｂｉ逦＝逡逑＇Ａ—逡逑！＼邋ｓｔ＝【ｂｈ＞［ｂ］ｓ逦１逦＂￣￣ｙ邋；邋＝ｉＡＶｉ＋【Ｈ３ｏ？］／／ｇ逡逑；＼邋ｌ邋＾ＬＢｋｄ邋＾－ｉＨｓｏｎ／＾｝逦；逦：逡逑Ｓｏｌｉｄ邋Ｐｈａｓｅ：逦ｉ邋Ｓｏｌｉｄ邋Ｐｈａｓｅ：邋＇逦Ｓｏｌｉｄ邋Ｐｈａｓｅ：邋＼邋Ｓｄｉｄ邋Ｐｈａｓｅ：逡逑Ｓａｌｔ逦＞邋Ｂａｓｅ逦Ａｃｉｄ邋！邋Ｓａｌｔ逡逑ｐＨ逦ｐＨ逡逑图１－５邋—元酸性（碱性）化合物与盐的ｐＨ－溶解度曲线图［３５］逡逑Ｆｉｇ．邋１－５邋ｐＨ－ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ邋ｐｒｏｆｉｌｅ邋ｏｆ邋ａ邋ｍｏｎｏｐｒｏｔｉｃ邋ａｃｉｄ邋（ｍｏｎｏｂａｓｉｃ）邋ｃｏｍｐｏｕｎｄ邋ａｎｄ邋ｓａｌｔＪ３５１逡逑制备成盐药物，选择合适的盐基是关键。盐基的选择需要考虑药物的活性逡逑成分与抗衡离子的解离常数、反应溶剂和安全性等因素［３８］。（ｌ）ｐＫａ值是选择逡逑５逡逑

标准曲线图,化合物

图３－１化合物１４标准曲线图逡逑Ｆｉｇ．３－１邋Ｔｈｅ邋ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ｃｏｍｐｏｕｎｄ邋１４邋ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｓｏｌｕｔｉｏｎ逡逑．３化合物１４及其相关盐在不溶介质溶液中平衡溶解度的测定逡逑分取０．２ｍＬ不同溶剂（生理盐水、人工胃液、人工肠液）置于１．５ｍＬ的逡逑中，，慢慢分次少量加入化合物１４游离碱以及其盐酸盐、氢溴酸盐、磷柠檬酸盐以及马来酸盐，摇晃直至化合物不再溶解，６０°Ｃ水浴１小时，（溶液澄清，若澄清，继续加相应化合物，直至不再溶解），３０°Ｃ超声３０ｍｉｎ，有溶解，继续加相应化合物），置于气浴恒温摇床中，３７°Ｃ，２４ｈ后，１００００印１１１／１１１１１１，１0１１１丨１１。吸取上层的饱和清液，按“３．２．１．１”项下色谱条件定（超出线性范围的样品，用流动相稀释一定的倍数，保证样品峰面积范围内），记录峰面积。按外标法以峰面积计算化合物１４游离碱以及相生理盐水、人工胃液以及人工肠液中的平衡溶解度，并比较各溶解度情况结果见表３－１。逡逑
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R914

【参考文献】