富含γ-氨基丁酸的米糠提取物神经保护作用研究

发布时间：2020-06-16 23:59

【摘要】：阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种中枢神经系统的退行性疾病,大量研究表明,β-淀粉样蛋白(Amyloid β-protein,Aβ)在AD的发病过程中扮演着重要角色。米糠是稻米加工的主要副产物,含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素和矿物质等多种营养成分,并含有生育酚、生育三烯酚、Y-谷维素等多种活性成分,具有重要营养价值。目前研究认为,米糠提取物(rice bran extracts,RBE)神经保护作用主要归因于米糠中生育酚、生育三烯酚和γ-谷维素等活性成分的抗氧化特性;但富含γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的米糠提取物是否具有神经保护作用却鲜有报道。本课题首先以富含GABA的米糠与普通米糠为原料制备提取物;其次,利用Aβ25-35损伤的PC12细胞及原代培养乳鼠海马神经细胞,建立了 AD体外细胞模型;最后,选取普通米糠提取物为对照,观察了富含GABA的米糠提取物的神经保护效果,并初步探究了其神经保护作用机制。本研究主要包括两个部分内容:第一部分是富含GABA的米糠提取物对PC12细胞保护作用研究。利用Aββ25-35处理PC12细胞建立AD体外模型,并以RBE预孵育、共孵育或Aβ25-35损伤处理后孵育作为干预条件,观察RBE对Aβ25-35诱导损伤的PC12细胞是否具有保护效果。结果表明,三种不同孵育方式均对PC12细胞具有保护作用,预孵育方式的干预浓度要低于共孵育及Aβ25-35损伤处理后再孵育的方式。第二部分是富含GABA的米糠提取物对原代培养乳鼠海马神经细胞保护作用研究。利用Aβ25-35处理原代培养的海马神经细胞建立AD体外模型,探究RBE预孵育的保护作用及可能机制。结果表明,富含GABA的米糠提取物神经保护效用优于普通米糠,其机制与减轻细胞损伤、抑制凋亡、降低氧化应激水平及改善线粒体功能有关。
【学位授予单位】：天津科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R96
【图文】：

含量检测,米糠,液相色谱图,提取物

集成小团簇状生长。以终浓度为５０ｎｇ／ｍＬ的ＮＧＦ诱导后，细胞停止分裂，并长出类逡逑似交感神经元样的突起。随着诱导时间的延长，细胞体积增大，突起增多并增长，可逡逑形成网络（图３－２）。逡逑，’魏逡逑（ａ）邋ＰＣ邋１２邋ｃｅｌｌｓ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ｉｎ邋ｎｏｍｉａｌ邋ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ；邋（ｂ）邋ＰＣ邋１２邋ｃｅｌｌｓ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ｉｎ邋５０邋ｎｇ／ｍＬ邋ＮＧＦ邋ｆｏｒ邋４Ｘｈ逡逑图３－２？（：１２细胞形态（１０（）＞＜）逡逑Ｆｉｇ．３－２邋Ｔｈｅ邋ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｓｈａｐｅｓ邋ｏｆ邋ＰＣ邋１２邋ｃｅｌｌｓ邋（１邋（）0ｘ邋）逡逑３．１．３不同浓度ＲＢＥ处理对ＰＣ邋１２细胞活性的影响逡逑以终浓度分R%为邋５０、１００、２００、４００、８００、１６００邋（ｐｇ／ｍＬ）的邋ＲＢＥ邋处理邋ＰＣ１２邋细逡逑１９逡逑

细胞损伤,细胞存活率

３．１．５邋ＲＢＥ共孵育对Ａｐ２５－３５致ＰＣ１２细胞损伤的影响逡逑采用不同浓度的ＲＢＥ与２０＾ｍｏｌ／ＬＡｐ２５－３５共孵育的方式处理细胞２４ｈ，观察ＲＢＥ逡逑对受损ＰＣ邋１２细胞的保护作用。从图３－５可以看出，与对照组比较，经２０ｊｉｎｉｏｌ／ＬＡｐ邋２５－３５逡逑处理２４ｈ的ＰＣ１２细胞存活率显著降低（Ｐ＜０．０５），提示ＡＤ模型建立成功；与Ａｐ２５－３５逡逑组比较，当ＲＢＥ浓度为４００｜ａｇ／ｍＬ时，细胞存活率显著提高，提高了邋１６．２５％（Ｐ＜０．０１）；逡逑随着ＲＢＥ浓度的增加，细胞存活率呈现先上升后下降的趋势，ｌＯＯＯｐｇ／ｍＬ组细胞存逡逑活率最高，与Ａｐ邋２５－３５组比较，细胞存活率提高了邋２３．８３％邋（Ｐ＜０．０１）。因此，可选取逡逑１００（Ｈｉｇ／ｍＬ作为ＲＢＥ共孵育的适宜干预浓度。逡逑0邋１５０－逡逑Ｉ逦＊＊邋－邋＊＊逦？逡逑＾逦ｔ邋ｒ＾ｉ邋ｒ＾ｌ逡逑0邋１００－ｎ逦ｒ＾＼逦－ｒ逡逑■逦ｉ邋媝：：：：逡逑Ｉ邋５0－逦１逡逑｜邋ｉ逡逑ｃ；邋0ｉｉｉ，ｍ，ｎ，１１，１１，１逡逑ｄ、逦逡逑ＲＢＥ（Ｍｇ／ｍＬ）＋Ａｐ２５．Ｊ５逡逑图３－５邋ＲＢＥ共孵育对Ａｐ２５．３；致ＰＣＩ邋２细胞损伤的影响逡逑Ｆｉｇ．３－５邋Ｅｆｆｅｃｔｓ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＲＢＥ邋ａｇａｉｎｓｔ邋ＡＰ２５－３５－ｉｎｄ

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