异柠檬酸裂解酶肽类抑制剂筛选及合成

发布时间：2017-03-28 09:18

  本文关键词：异柠檬酸裂解酶肽类抑制剂筛选及合成，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：当今,结核病(TB)依然侵害人们健康。因为多药耐药(MDR)与普遍抗药性(XDR)结核杆菌的产生,使结核病在世界范围内产生越来越难以治愈的现象。分枝杆菌持续感染和耐药分枝杆菌的产生和扩散,是当今结核病研究应对的两大困难,迫切需要研发新型抗结核药物。异柠檬酸裂解酶(isocitrate lyase, ICL)是分枝杆菌利用乙醛酸循环途径中得到能量的一个重要限速酶,对结核杆菌维持其持留状态起决定性作用,因此我们选择以异柠檬酸裂解酶(ICL)作为研究新型抗结核药物的靶点。通过噬菌体的肽库筛选并合成具有抑制ICL活性的多肽。又以ICL的三维晶体结构为基础,利用Discovery Studio 2.1中ligentfit模块,将筛选出的多肽与优化后的ICL蛋白晶体进行分子对接。用Fmoc固相的合成方法合成能够成功对接的多肽,并进行生物活性检测。结果利用噬菌体肽库的筛选得到了6条的七肽成功和ICL蛋白的晶体对接。合成后的6条七肽质谱检测结果均正确,6条七肽的分子量分别为917、746、848、796、658、776。利用超微量分光光度计对6条七肽进行体外生物活性监测,其对ICL酶的活性均明显具有抑制的作用,抑制率分别为75%、64%、66%、77%、78%、67%。其中3条七肽抑制率超过了70%。通过Discovery Studio2.1中Binding Site Analysis模块,对ICL晶体结构分析,首次发现ICL四聚体中央部分另存在一个较大空洞,其能结合配体成为新的抑制位点。本研究通过虚拟筛选优化了ICL抑制剂的筛选过程,筛选并合成ICL抑制剂,为抗结核多肽药物研发奠定基础。
【关键词】：异柠檬酸裂解酶 多肽 噬菌体肽库 虚拟筛选
【学位授予单位】：长春工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R914
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 第一章 绪论6-17
• 1.1 异柠檬酸裂解酶与结核分枝杆菌6-9
• 1.1.1 异柠檬酸裂解酶基本介绍6-7
• 1.1.2 结核分枝杆菌基本介绍7-8
• 1.1.3 异柠檬酸裂解酶与结核分枝杆菌关系8-9
• 1.2 异柠檬酸裂解酶在抗结核研究中的进展9-10
• 1.3 分子对接技术简介10-14
• 1.3.1 分子对接10
• 1.3.2 分子对接算法的基本原理10-11
• 1.3.3 分子对接的发展方向11-14
• 1.3.4 分子对接有待解决的问题14
• 1.4 多肽固相合成法14-17
• 1.4.1 多肽固相合成14
• 1.4.2 多肽固相合成原理14-15
• 1.4.3 Fmoc固相合成法15-17
• 第二章 实验材料与方法17-26
• 2.1 实验试剂17-18
• 2.2 实验仪器18-19
• 2.3 常用试剂配制19-20
• 2.4 多肽氨基酸20
• 2.5 分子对接20
• 2.6 多肽的固相合成20-21
• 2.6.1 多肽固相合成步骤20-21
• 2.6.2 多肽的分析、纯化和分子量鉴定21
• 2.7 ICL蛋白的诱导表达及纯化21-24
• 2.7.1 菌种21
• 2.7.2 菌种的培养及表达21-22
• 2.7.3 纯化前菌体处理22
• 2.7.4 纯化蛋白ICL22-23
• 2.7.5 层析柱处理23
• 2.7.6 ICL蛋白诱导表达产物及纯化产物的鉴定23-24
• 2.8 ICL蛋白活性实验24-25
• 2.9 检测合成多肽对ICL的抑制效应25-26
• 第三章 实验结果26-37
• 3.1 分子对接结果26-29
• 3.2 多肽的固相合成29-31
• 3.3 ICL蛋白的诱导表达及纯化结果31-32
• 3.4 ICL纯化蛋白的活性检测32-33
• 3.5 合成七肽对ICL抑制作用检测33-36
• 3.6 Di scovery Studio 2.1软件模拟结合位点36-37
• 第四章 讨论37-40
• 第五章 结论40-41
• 致谢41-42
• 参考文献42-46
• 作者简介46
• 攻读硕士学位期间研究成果46-47

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 冯淑娟,齐传民,郭雪峰;新N_3S型配位结构的小肽分子合成及其合成方法研究[J];北京师范大学学报(自然科学版);2002年04期

2 周逸明,陈常庆;加压素固相合成方法的研究[J];中国医药工业杂志;2000年02期

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本文编号：272015