基于胚胎—肿瘤映射的抗肿瘤转移药物筛选及药理研究

发布时间：2017-03-28 10:09

  本文关键词：基于胚胎—肿瘤映射的抗肿瘤转移药物筛选及药理研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：胚胎早期发育过程中,原肠和神经嵴等重要组织的分化由上皮间充质转变(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)机制驱动。恶性肿瘤具有逆胚胎转型能力,其侵袭转移与演进过程也依赖于EMT,以EMT为共性分子特征的胚胎-肿瘤映射现象可被用于抗肿瘤药物的筛选。通过斑马鱼早期胚胎发育映射肿瘤转移的体内过程,可更有效地筛选抗肿瘤转移药物。Twist1蛋白是调控正常胚胎与肿瘤发生EMT的重要和始动性转录因子,在恶性肿瘤侵袭、转移和演进过程中具有重要作用。本课题构建了Twist1启动子的绿色荧光报告基因改造斑马鱼模型,通过观察荧光强度和组织定位变化来映射肿瘤EMT,建立筛选体系并对五十种合成化合物和中药单体进行了高通量筛选,寻找潜在的抗肿瘤增殖侵袭转移的EMT抑制剂。在此基础上,对候选化合物进行“4×4”Dual-luciferase报告基因检测系统及高内涵检测系统验证了筛选得到的效果最好的三种合成化合物和中药单体:多西环素、小白菊内酯和芹菜素。利用细胞功能实验、高内涵表型分析、Westernbloting、表达谱芯片、LC-MS/MS及荷瘤动物模型,分别对这三种分子进行了深入的研究。结果显示,多西环素可在EMT转录层面产生广泛抑制作用,产生抗肿瘤生长和转移的作用,在肺癌上具有很好的抑瘤活性和抗转移作用;小白菊内酯则通过Cys-AlaIle组成的共适口袋结合上游多个靶点介导的广泛EMT转录因子抑制作用,产生抗炎抗肿瘤转移的多重作用;芹菜素则通过NF-κB—Snail pathway直接通过抑制E-cadherin的表达抑制肝癌EMT。本研究通过构建肿瘤-胚胎映射模型,建立了一种新型抗肿瘤药物筛选体系和药理研究策略,研究了三种分子的抗肿瘤作用同时也进一步证实了基于胚胎-肿瘤映射的抗肿瘤转移药物筛选体系的可行性和新药研发意义。
【关键词】：肿瘤 胚胎肿瘤映射 上皮间充质转变 药物筛选
【学位授予单位】：南开大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R965
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 第一章 引言8-13
• 第一节 研究现状、成果8-11
• 第二节 研究目的、方法11-13
• 第二章 斑马鱼胚胎-肿瘤映射模型构建及药物筛选13-17
• 第一节 Twist1-EGFP转基因斑马鱼动物模型构建13-15
• 第二节 药物筛选结果及评价15-17
• 第三章 Dual-luciferase报告基因检测系统构建及结果评价17-24
• 第一节 Dual-luciferase报告基因检测系统构建17-21
• 第二节 结果评价21-24
• 第四章 高内涵检测系统构建及结果评价24-29
• 第一节 高内涵检测系统的构建24-26
• 第二节 结果评价26-29
• 第五章 多西环素抑制肺癌EMT29-49
• 第一节 多西环素对人肺癌细胞增殖迁移侵袭能力的影响29-35
• 第二节 多西环素对人肺癌细胞EMT标志物及细胞形态的影响35-37
• 第三节 多西环素对人肺癌细胞EMT转录因子的影响37-41
• 第四节 多西环素动物水平的药理研究41-47
• 第五节 讨论47-49
• 第六章 小白菊内酯抑制肺癌EMT49-66
• 第一节 小白菊内酯对人肺癌细胞增殖迁移能力的影响49-51
• 第二节 小白菊内酯对人肺癌细胞系分子表型的影响51-52
• 第三节 小白菊内酯影响人肺癌细胞EMT相关的骨架重排52-54
• 第四节 小白菊内酯广泛抑制了与EMT相关的细胞形态54-57
• 第五节 小白菊内酯抑制人肺癌细胞系中EMT相关的转录因子57-59
• 第六节 小白菊内酯体内抑瘤作用59-63
• 第七节 讨论63-66
• 第七章 芹菜素通过NF-κB/Snail信号通路抑制肝癌细胞EMT66-83
• 第一节 芹菜素对人肝癌细胞增殖迁移侵袭能力的影响66-69
• 第二节 芹菜素对人肝癌细胞形态及EMT标志物的影响69-73
• 第三节 芹菜素抑制人肝癌细胞NF-κB的活性和表达量73-74
• 第四节 芹菜素抑制人肝癌细胞Snail的活性和表达量74-76
• 第五节 芹菜素在荷瘤鼠中的抗癌作用76-79
• 第六节 芹菜素对于荷瘤鼠肿瘤中EMT标志物的影响79-80
• 第七节 芹菜素在体内对NF-κB/Snail信号通路的影响80-81
• 第八节 讨论81-83
• 第八章 结论83-84
• 参考文献84-89
• 致谢89-90
• 个人简历及在学期间发表的学术论文与研究成果90

  本文关键词：基于胚胎—肿瘤映射的抗肿瘤转移药物筛选及药理研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：272051