基于两步释放的术连微丸口服结肠靶向胶囊的研制及体内外评价

发布时间：2020-06-20 07:54

【摘要】：溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种常见的自身免疫性疾病,临床表现以消化系统症状为主,包括腹痛、腹泻、粘液脓血便等,其病程迁延难愈,常反复发作,严重者可致结肠癌。目前UC的临床治疗仍以药物手段为主,而常用的化药类存在只能缓解症状,难以根治及不良反应明显等缺点,降低了患者的顺应性。中医药在治疗多病因综合导致的慢性胃肠道疾病方面独具优势,在对症治疗的同时重视整体的平衡。因此,从传统中药中寻找和开发新型抗UC药物具有良好的发展潜力和实用意义。白术挥发油中的主要成分白术内酯Ⅰ能够健脾运脾,促进肠管吸收,调节肠管运动。黄连中的盐酸小檗碱等生物碱类成分则具有清热燥湿、抗菌消炎的药理活性,能够显著抑制右旋葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠UC症状。防风含有的挥发油、色原酮类、香豆素类等成分则具有解热镇痛、抗炎抗氧化、免疫调节等作用。对于溃疡性结肠炎的药物治疗,传统的口服及直肠给药都存在一定的不足。使用不便,药物难以到达作用部位等影响了药物疗效的发挥。口服结肠靶向给药系统具有良好的稳定性和重现性,能够将药物定位于小肠末端至结肠处释放,使药物在病变处能够维持较长时间的高药物浓度,并提高药物的生物利用度。本研究将上述三味中药与口服结肠靶向给药系统相结合,围绕术连微丸的制备和体内外评价开展研究,主要包括:原料药的质量控制;术连微丸的处方组成和制备工艺考察;微丸中指标成分含量测定方法的建立及制剂学特性和稳定性的考察,并对肠溶微丸的体外释放特性和体内靶向性进行评价;考察原料药与术连微丸在大鼠灌胃给药后指标成分在血浆中的药代动力学过程;建立大鼠溃疡性结肠炎模型,对术连微丸抗UC的疗效和机制进行探究。本研究第一部分建立了三种原料药中指标成分的含量测定方法,包括LC-MS/MS法测定白术挥发油中的白术内酯Ⅰ的含量,HPLC法分别测定黄连提取物中的盐酸小檗碱和防风提取物中的升麻素。三种条件的系统适用性实验均符合标准,可以用于三种指标成分的定量检测。本研究第二部分采用白术挥发油包合物,黄连、防风提取物为原料,制备了术连微丸口服结肠靶向胶囊,通过单因素实验和正交实验优化了包合工艺,微丸处方组成和挤出-滚圆制备微丸的工艺参数,同时对肠溶衣的处方组成进行了筛选,最终制备的胃溶和肠溶微丸具有较好的圆整度和收率。本研究第三部分对胃溶和肠溶微丸中的指标成分进行了含量测定。两种微丸的肉眼观察图像和扫描电镜图像显示微丸为光滑的球形或椭球形,粒度分布均匀,表明微丸的制备工艺合理且稳定。两种微丸的制剂学性质符合标准且贮存稳定性良好,主要成分的含量和释放特性受环境影响小。肠溶微丸的体外评价结果表明其具备良好的抗酸能力,口服后可以在肠道内释放药物,提高药物的生物利用度。其释药行为更符合Higuchi方程释药模型(r=0.8682),回归方程为Q=34.615 t ~(1/2) 52.463。本研究第四部分对术连微丸的药代动力学进行了考察。建立了血浆中白术内酯Ⅰ和盐酸小檗碱的LC-MS/MS含量测定方法,此法能够对血浆中微量药物进行定量且方法专属性良好,受血浆内源性物质影响较小;对于白术内酯Ⅰ,微丸组的AUC_(0→36)是原料药组的1.53倍,MRT是原料药组的1.37倍,达峰后的血药浓度更加平稳,生物利用度明显提高。盐酸小檗碱采用原料药给药时C_(max)较低,制备成微丸给药后,T_(max)后延,而C_(max)和AUC_(0→54)明显升高,药物在盲肠和结肠部位释放,使病变处能够维持较高的药物浓度,从而提高了药物的生物利用度。本研究第五部分对术连微丸的药效学进行了研究。建立DSS诱导的大鼠UC模型,考察术连微丸对大鼠体重变化、便血腹泻情况、结肠黏膜损伤情况和组织病理形态的影响。采用ELISA方法测定血清和组织中IL-1β、IL-4、IL-6、TNF-α和MPO的表达水平。术连微丸中、高剂量组能够改善大鼠的体重降低和便血腹泻情况,降低各类评分,有效控制结肠粘膜上皮细胞的损伤并改善结肠粘膜的充血和肿胀。其抗UC的作用机制主要是抑制炎症因子和减少氧自由基的生成。肠溶微丸的体内靶向性评价结果表明微丸在到达结肠后仍能保持较高的完整性,这说明其具备良好的抗酸能力和结肠靶向特性,口服后可以在胃肠道内释放药物,从而促进药物的吸收,提高生物利用度。本课题的研究,将为溃疡性结肠炎的临床治疗提供一种新的有效药物,能够丰富中药制剂学的研究内容,对促进溃疡性结肠炎的治疗和中药现代化具有重要意义。
【学位授予单位】：中国人民解放军海军军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R943
【图文】：

质谱图,干燥气,谱条件,雾化压力

谱条件谱柱：Agilent ZORBAX Extend-C18 柱（2.1×100 mm，3.5 μm）；流动相： %甲酸水溶液（75:25）；流速：0.3 mL/min；进样量：1 μL；柱温：35 ℃。谱条件SI 离子源，扫描方式为阳离子 MRM 模式，干燥气温度：320 ℃，干燥气流速in，雾化压力：20 psi，裂解电压 165 V，碰撞能量 35 eV，定量离子对为 m/z→128.1 和 m/z = 231.1→143.2[29, 30]。分子离子的选择术内酯Ⅰ 对照品在 MS 2 Scan 模式下的全扫描质谱图如图 1-1，主要组成H］+峰，最终确定其准分子离子峰为 m/z = 231.1。

碎片离子,质谱图,干燥气,流速

图 1-2 白术内酯Ⅰ碎片离子扫描质谱图Fig.1-2 Product ion scan mass spectrum of ATR-1干燥气流速的选择以氮气（N2）为干燥气体，分别考察了干燥气流速为 8、10、12 L/min 时对白术Ⅰ质谱响应值的影响，图 1-3 结果表明，干燥气流速为 8 L/min 时响应值最高，将干燥气流速定为 8 L/min。

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