新西兰兔血浆中妥洛特罗分析方法建立和雷公藤多苷片在小鼠体内代谢产物研究

发布时间：2020-06-22 00:26

【摘要】：妥洛特罗作为一种长效β2肾上腺素受体激动剂,近年来以贴剂的形式在临床上被广泛应用,主要用于缓解支气管哮喘、急性支气管炎、慢性支气管炎、肺气肿和慢性阻塞性肺病(COPD)所致的呼吸困难等症状,具有很好的临床有效性和安全性。开发儿童用妥洛特罗贴剂受到临床医生的关注,为了配合制剂学科研发儿童用妥洛特罗贴剂,筛选最佳制剂处方,本论文建立了生物样本中妥洛特罗高效、灵敏、准确的分析方法,为制剂开发和贴剂的透皮吸收特点考察提供分析手段。首先建立测定新西兰兔血浆中妥洛特罗含量的超高效液相色谱联用三重四极杆质谱(UHPLC-MS/MS)的分析方法,并进行了全面验证。方法验证结果表明,妥洛特罗在新西兰兔血浆中最低定量限为0.01ng/mL,线性范围在0.01-6ng/mL内,相关系数r0.999,线性良好。妥洛特罗和内标的Carryover分别为6.1%和0.31%。4个不同浓度水平质控样本(LOQ、LQC、MQC和HQC)的日内和日间的准确度分别在95.0-111%和94.6-110%之间,精密度RSD值均小于6.9%。提取回收率范围为80.9-85.3%,基质效应范围为92.2-109%。稳定性考察了未处理的样品在室温条件(20℃)下放置6h、经过3次冻融、在冰箱储存条件(-80℃)放置2个月以及处理过的样品在自动进样器温度(4℃)下放置24h的稳定性,准确度均在94.1-113%之间。方法验证结果表明,本研究所建立的分析方法符合中国药典《9012生物样品定量分析方法验证指导原则》的要求,能够满足新西兰兔血浆中妥洛特罗含量测定结果准确可靠的要求。其次,采用所建立的方法测定妥洛特罗贴剂给药后新西兰兔血浆样本中妥洛特罗的浓度,计算获得相关药代参数,并进行初步的透皮吸收特点考察。动物实验共设置2个给药组,包括参比贴剂阿米迪组和受试贴剂妥洛特罗组。实验结果表明,两批受试贴剂与参比贴剂相比:AUC(0-t)和AU(0-∞)一致,几何均值比的90%置信区间均在85.9-113.9%之间;Cmax不一致,90%置信区间的数值比值范围在21.0-140.0%之间,超出85.00-125.00%的等效区间。表明受试贴剂与参比贴剂相比透皮吸收特点存在差异,制剂处方需进一步优化。雷公藤多苷片由雷公藤(Triptetygium wifordii Hook.f.)的提取物加工而成,临床上被广泛用于肾病综合征、类风湿性关节炎、红斑狼疮等自身免疫性疾病的治疗,效果显著。但其引起的肝脏和肾脏毒性不容忽视。雷公藤多苷片的有效性和毒性作用物质基础和机制研究成为近年来的研究热点。本论文开展了雷公藤多苷片在小鼠体内的代谢研究。采用BALB/c小鼠作为研究对象,分为三组,高剂量(LD50剂量,900mg/kg)单次给药组、低剂量(治疗剂量,15mg/kg)单次给药组和低剂量多次(7天)给药组,给药后取小鼠的肝脏、肾脏和血浆样本,采用实验室已建立的高效液相色谱四极杆串联飞行时间质谱分析方法(HPLC-QTOF-MS),分析生物样本中雷公藤多苷片的原型成分和代谢物。首先采集对照品和样品的一级和二级高分辨质谱数据,进一步通过保留时间、一级和二级高分辨质量数、质谱碎片裂解规律,以及结合文献报道数据对化合物进行结构推测和鉴定。在小鼠体内共检测到雷公藤多苷片的48种原型成分和99种代谢物。在高剂量单次给药组检测到48种原型成分和99种代谢物;低剂量单次给药组检测到15种原型成分和7种代谢物;低剂量多次给药组中检测到32种原型成分和16种代谢物。通过Discovery StudioTM软件对小鼠体内暴露成分和代谢物的肝毒性进行预测。结果在高剂量给药组共有21种原型成分和35种代谢物经预测具有潜在肝毒性;低剂量单次给药组有6种原型成分和3种代谢物具有潜在肝毒性;低剂量多次给药组中有13种原型成分和5种代谢物具有潜在肝毒性。三个给药组共有的毒性成分有6种。通过研究雷公藤多苷片体内暴露成分的潜在肝毒性,为监测毒性成分和代谢物,发现早期毒性趋势提供了依据。多次给药与单次给药相比暴露成分出现蓄积趋势,提示临床上应监测给药周期。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R965
【图文】：

类型和质量亏损。逡逑ＭａＳ等［１１］将ＢＳ方法成功应用于在ＨＬＭ孵育中的４个测试药物（氯氮平，双逡逑氯芬酸，丙米嗪和他克林）谷胱甘肽结合物的快速检测。如图１所示，Ａ图为经彻逡逑底的背景扣除后，丙咪嗪与ＨＬＭ和５ｍＭ邋ＧＳＨ孵育的基峰图谱显示６个不同的ＧＳＨ逡逑缀合物色谱峰（ＩＭ１－ＩＭ６）。相反，这些代谢物在未处理的原始色谱图中难以发现逡逑（Ｂ）

逦第二章新西兰兔血浆中妥洛特罗ＵＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ定量分析方法建立逦逡逑图所示，在全扫描模式下，妥洛特罗和内标妥洛特罗－ｄ９的丰度最高的离子均为准分逡逑子离子峰［Ｍ＋Ｈｆ，分别为２２８．１和ｍ／ｚ邋２３７．１，因此，确定妥洛特罗和内标妥洛逡逑特罗－ｄ９的母离子分别为ｍ／ｚ邋２２８．１和＾＾２３７．１。在子离子扫描模式下，由于仪器默逡逑认的ｆｒａｇｍｅｎｔｏｒ值为３８０Ｖ，设定化合物母离子的值，采集化合物在不同碰撞能逡逑量下的碎片禹Ｉ子，１５ｅＶ下的＋

本文编号：2724884