姜烯酚6对NCM460、HCT116及HT29干预表达差异的研究

发布时间：2020-07-02 01:09

【摘要】：目的:通过构建结直肠癌细胞氧化损伤模型,运用体外细胞实验研究6-姜烯酚对过氧化氢(H_2O_2)诱导正常肠上皮细胞(NCM460)、原位癌细胞(HCT116)及原位癌细胞(HT29)氧化损伤的不同作用及可能的分子机制,进一步探讨6-姜烯酚抑制结直肠癌细胞增殖的作用靶点及与相关凋亡基因表达之间的关系。方法:通过相差倒置荧光显微镜观察24h后各浓度6-姜烯酚对NCM460、HCT116及HT29细胞形态和数量的改变。CCK8法筛选各浓度6-姜烯酚对NCM460、HCT116及HT29增殖的影响及存活率,并绘制细胞增殖曲线。Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测不同分组NCM460、HCT116及HT29凋亡情况。Western-blot检测分析不同浓度6-姜烯酚对H_2O_2诱导NCM460、HCT116及HT29后相关凋亡基因蛋白(A2F、MCC1、Caspase3、PARP1和BCL2)不同表达情况。结果:CCK8法示:与对照组相比,NCM460-H_2O_2组细胞数目减少,NCM460-6姜烯酚组,细胞数却一定程度上增加,尤其在NCM460-H_2O_2-6姜烯酚组,随着6-姜烯酚浓度由5μM到15μM,细胞数呈现明显不同程度地增高(p0.05)。反观在HCT116和HT29各细胞分组,HCT116-H_2O_2和HT29-H_2O_2组细胞数明显减少,并且随着6-姜烯酚浓度的增加,各分组细胞数也发生不同程度减少,抑制了细胞增殖(p0.05)。Annexin V-FITC/PI流式细胞术示:与对照组相比,在NCM460各分组细胞中,随着6-姜烯酚浓度由5μM到15μM,其中右上象限和右下象限死亡细胞数之和均发生不同程度减少(p0.05);但在HCT116和HT29各分组细胞中,随着6-姜烯酚浓度的不断升高,右下象限和右上象限死亡细胞数之和却呈现不同程度的增多(p0.05)。Western-blot检测示:与对照组相比,6-姜烯酚可不同程度增加H_2O_2诱导NCM460中BCL2表达,却降低了MCC1、A2F、Caspase3、PARP1表达(p0.05),在一定程度上可以保护细胞免受H_2O_2的氧化损伤,促进NCM460增殖;但是在HCT116和HT29中,6-姜烯酚却可不同程度增加了MCC1、A2F、Caspase3、PARP1表达,反而抑制BCL2表达(p0.05),一定程度上加剧了H_2O_2对HCT116和HT29的氧化损伤作用,抑制HCT116和HT29增殖。结论:6-姜烯酚对H_2O_2诱导NCM460具有明显的抗氧化保护作用,但对HCT116和HT29却呈现相反的增强氧化损伤作用,可抑制结直肠肿瘤细胞增殖,促使肿瘤细胞凋亡。本实验研究发现为进一步研究6-姜烯酚抑制结直肠肿瘤增殖的相关靶点或具体机制研究奠定了理论基础。
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R96

【参考文献】