异烟肼、利福平缓释微球的制备及体内外释药性能的研究

发布时间：2020-07-09 11:10

【摘要】：目的制备同时包封异烟肼(INH)和利福平(RFP)的聚乳酸羟基乙酸(PLGA)缓释微球,优化微球的制备工艺,研究微球在体内外的释药性能,为以后临床上骨关节结核病灶清除术后的治疗提供实验依据。方法1.异烟肼、利福平缓释微球的制备及工艺优化通过复乳溶剂挥发法(W/O/W)制备INH-RFP-PLGA微球,以载药率、包封率为主要考察指标,应用单因素试验考察油相PLGA浓度、外水相PVA浓度、药物载体比、油水比、药物之间等因素对微球载药率、包封率的影响;再应用正交试验筛选最佳工艺,以最佳条件制备INH-RFP-PLGA微球和单药微球(INH-PLGA微球和RFP-PLGA微球)。2.缓释微球在体内外的释药研究将制备的微球分成双药微球组(INH-RFP-PLGA微球)及单药混合微球组(INH-PLGA微球,RFP-PLGA微球)。分别装入透析袋中,再注入PBS液,在水浴摇床中进行体外释药试验;在体内药物缓释研究将SD大鼠65只随机分成双药微球组、单药混合微球组、阴性对照组、空白对照组,将准备好的微球植入大鼠骶脊肌内,阴性对照组只做切开处理不植入任何微球,空白对照组不做任何处理。通过大体观察、局部组织及静脉血中药物分布、生化指标检测、组织形态学等方面观察。采用高效液相色谱法(HPLC)检测溶剂、肌肉及血浆中的药物浓度。结果1.异烟肼、利福平缓释微球的制备及工艺优化筛选出的最佳工艺为油相PLGA浓度为150mg/ml,外水相PVA浓度为20mg/ml,油水比为1:10,药物载体比为1:4。最佳工艺制备的INH-RFP-PLGA微球异烟肼和利福平的载药率分别为(11.06±0.25)%和(14.78±0.60)%,包封率分别为(37.75±1.41)%和(57.40±0.95)%;单药微球异烟肼和利福平的载药率分别为(11.36±0.24)%和(15.12±0.54)%,包封率分别为(38.83±0.61)%和(58.46±1.45)%,单双药物微球INH和RFP的载药率和包封率无显著差异(P0.05)。冻干收集的微球,分散性良好,在电镜下观察其表面光滑、球形良好,微球的平均直径为278±77μm。2.缓释微球在体内外的释药研究(1)缓释微球体外的缓释研究本研究制备的单双药物微球在体外平稳缓释45天,单药和双药微球异烟肼24h体外累计释放率(突释率)分别为26.53%、27.75%,利福平24h体外累计释放率为18.67%、19.26%;体外缓释6天时,异烟肼累计释药率超过50%;体外缓释15天时,RFP累计释药率超过50%;体外缓释45天时,单药混合微球组和双药微球组INH的累计缓释率分别约90.27%和91.83%;RFP的累计缓释率分别约72.96%和73.79%。比较两组微球组间INH、RFP在体外缓释各个时间点的累计释药率,两组之间无显著性差异(P0.05)。在1天、10天、45天时,通过比较两组微球组内INH和RFP的累计释药率,发现各个时间点INH累计释药率明显高于RFP,有显著性差异(P0.05)。比较两组微球组内INH和RFP阶段释药率,发现前20天,INH阶段释药率较RFP高,20天后RFP阶段释药率较INH高。(2)缓释微球体内的缓释研究不同时间点两组微球组间INH和RFP在局部肌肉和血浆中的药物浓度,两组之间没有统计学差异(P0.05)。4天时单双药物微球组肌肉和血浆中INH浓度达到最高,1w后药物浓度逐渐趋于稳定;而7天时RFP浓度达到最高。8w时局部肌肉中单药混合微球INH、RFP的药物浓度分别为0.44μg/g、0.73μg/g,双药微球INH、RFP的药物浓度分别为0.43μg/g、0.75μg/g,仍大于各自10倍最低有效抑菌浓度(MIC)。比较同组微球中INH和RFP在肌肉和血浆浓度差,局部肌肉中的药物浓度明显高于血浆中药物浓度,比较有显著性差异(P0.05)。在1周时,单双药物微球组大鼠AST、ALT较阴性对照组和空白对照组有短暂升高,比较有显著性差异(P0.05);Scr、BUN各组之间无统计学差异(P0.05)。在4周时,四组大鼠肝肾功能检测各项指标相互比较各组之间无统计学差异(P0.05)。在1、4周时,四组大鼠肝肾组织病理检查未见明显损伤。结论1.筛选出的最佳工艺为油相PLGA浓度为150mg/ml,外水相PVA浓度为20mg/ml,油水比为1:10,药物载体比为1:4;采用复乳溶剂挥发法制备同时包裹亲水性和亲脂性两种药物,相互不影响负载到微球中的含量。2.INH-RFP-PLGA缓释微球在体内外具有明显的缓释效果,药物之间互不影响释放,且微球中INH释药速度较RFP快;微球在体内局部维持有效浓度8周以上,且不会对肝脏、肾脏功能造成明显的损害。
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R943
【图文】：

HPLC色谱,异烟肼,利福平

1.2 色谱条件Hanbon C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱；流动相为甲醇：磷酸二氢钠（0.04mol4.5）=75∶25，流速 1.0ml/min；柱箱温度 30℃；检测波长 264nm；进样体积 20μ间范围 15min。1.3 专属性取配置好的 INH、RFP 标准液，采用上述色谱条件进行检测，得到色谱图 1（A）谱图显示 INH 在 3.22 分钟出峰，而 RFP 在 6.54 分钟出峰；取适量空白微球用二氯溶解，加入甲醇稀释后，经 0.22μm 微孔滤膜过滤后，进样检测，色谱图如图 1（示；将适量 INH、RFP 溶解于甲醇，离心后，经 0.22μm 微孔滤膜过滤后，进样检图 1（C）所示。通过比较上述色谱图结果表明，制备微球所用辅料（PVA、PLGA）醇溶液均对异烟肼和利福平的色谱峰测定无干扰，说明该检测方法专属性符合要INH RFP

标准曲线,异烟肼,利福平,标准曲线

宁夏医科大学硕士学位论文材料与方法2.1.4 标准曲线建立将上面配置好的 INH、RFP 浓度分别为 0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、50μg/ml 的标准液液，用 0.22 m 膜过滤后各进样 20 L按 2.1.2 项色谱条件测定峰面积，以药物浓度(y)为纵坐标，药物峰面积(x)为横坐标进行线性回归,绘制标准曲线，见图 2，得异烟肼标准曲线方程：y = 2.2176x + 0.0815 R= 0.9995，利福平标准曲线方程：y = 2.0306x + 0.177 R2 = 0.9996。结果表明 INHRFP 在 0.50-50μg/ml 范围内线性关系良好。

示意图,PLGA微球,微球,包封率

精密称取 3 份 10mg 微球，在避光条件下用 1ml 二氯甲烷将其溶解，待完全溶解后加入 10ml 的用流动相混合液，超声粉碎 20min，稀释液用 0.22 m 膜过滤后定容，按2.1.2 项色谱条件用 HPLC 检测药物峰面积，并将其代入标准曲线公式中计算出微球中药物含量。按照以下公式计算微球的载药率和包封率。以微球载药率和包封率为主要考察指标，考查微球制备过程中油相 PLGA 浓度、外水相 PVA 浓度、油水比、药物载体比及两药之间对微球载药率、包封率的影响。图 3 复乳溶剂挥发法制备 PLGA 微球的示意图2.3 徽球载药率与包封率的测定2.4 微球制备过程中的单因素考察

【相似文献】