阿米替林对骨癌痛大鼠GLAST影响的研究

发布时间：2020-07-12 09:22

【摘要】：目的研究阿米替林(amitriptyline,AMI)对骨癌痛(bone cancer pain,BCP)模型大鼠机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)、脊髓背角胶质细胞胞内及胞膜谷氨酸-天冬氨酸转运体(glutamate-aspartate transporter,GLAST)和脑脊液中谷氨酸浓度的影响,并探讨其可能机制。方法清洁级雌性SD大鼠90只,180-220g,随机分为6组,每组15只:空白对照组(CONT组)、假手术组(Sham组)、骨癌痛组(BCP组)、BCP+1.5mg/kgAMI组(AMI_(1.5)组)、BCP+3mg/kgAMI组(AMI_3组)、BCP+10mg/kgAMI组(AMI_(10)组)。CONT组不做任何处理,Sham组大鼠右侧后肢胫骨骨髓腔内注射10ul PBS液,术后第5d开始腹腔注射1ml生理盐水,每天两次,BCP组大鼠右侧后肢胫骨骨髓腔内注射等量Walker256大鼠乳腺癌细胞PBS混悬液,AMI_(1.5)组、AMI_3组及AMI_(10)组中在BCP模型建立后第5天开始,分别经腹腔注射1.5mg/kg、3mg/kg及10mg/kg AMI,每天两次。Von Frey纤毛测痛仪测定术前、术后第4d、7d、11d、14d、17d、21d各组大鼠注射癌细胞侧后肢机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT);RT-PCR检测各组大鼠术后第7d、14d、21d脊髓背角GLAST mRNA表达、Western Blot检测术后第7d、21d脊髓背角GLAST及术后第21d脊髓背角蛋白激酶A/蛋白激酶C(protein kinase A/C,PKA/PKC)表达、紫外分光光度法检测术后第7d、14d、21d脑脊液中谷氨酸(glutamate,Glu)浓度的变化。组间和组内采用单因素方差分析的统计方法,P0.05有统计学意义。结果(1)MWT变化:术前各组间大鼠术侧后肢MWT无明显统计学差异(P0.05),CONT组与Sham组大鼠术后MWT无明显统计学差异(P0.05);术后第7d、11d、14d、17d、21d,BCP组大鼠术侧后肢MWT较CONT组显著降低;AMI_(1.5)组与BCP组大鼠术侧后肢MWT无明显统计学差异(P0.05),AMI_3组、AMI_(10)组大鼠较BCP组术侧后肢MWT显著升高(P0.05);术后第11d、14d,AMI_3组与AMI_(10)组大鼠术侧后肢MWT无明显统计学差异(P0.05);术后第17d、21d,AMI_3组大鼠术侧后肢MWT明显低于AMI_(10)组(P0.05)。(2)RT-PCR检测结果:Sham组大鼠术后GLAST mRNA表达与CONT组无明显统计学差异(P0.05);BCP组大鼠脊髓背角GLAST mRNA表达较CONT组明显降低(P0.05);AMI治疗组脊髓背角GLAST mRNA表达与BCP组无明显统计学差异(P0.05)。(3)Western Blot检测结果:Sham组大鼠脊髓背角胶质细胞表面及细胞质中GLAST、PKA/PKC与CONT组无明显统计学差异(P0.05);BCP组大鼠脊髓背角胶质细胞表面及细胞内GLAST较CONT组明显降低,PKA/PKC明显升高(P0.05);AMI治疗组大鼠脊髓背角胶质细胞表面GLAST较骨癌痛组明显升高,细胞质中GLAST明显下降,PKA/PKC明显下降(P0.05)。(4)紫外分光光度法检测结果:Sham组大鼠脑脊液中谷氨酸浓度与CONT组无明显统计学差异(P0.05);BCP组大鼠脑脊液中谷氨酸浓度在建模后第7d、14d、21d较CONT组明显升高(P0.05);AMI治疗组大鼠脑脊液中谷氨酸浓度较BCP组明显降低(P0.05)。结论AMI可抑制骨癌痛大鼠MWT的降低,其机制可能与其降低骨癌大鼠脊髓背角PKA/PKC,从而介导大鼠脊髓背角GLAST从胶质细胞胞质转移到胞膜表面,继而降低脑脊液中谷氨酸浓度而实现的。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R965
【图文】：

2.4.1 准备好癌细胞、75%酒精、5 只 60-80g SD 幼鼠；2.4.2 75%酒精消毒幼鼠腹部，灌胃手势固定好幼鼠，左手固定，头朝下，旁正中线，在腹腔靠下的部位 1ml 无菌注射器垂直刺入，勿扎到心脏，回抽无将癌细胞注入幼鼠腹腔中，0.5ml/只，5×106个细胞/ml，缓慢拔出针头。2.5 抽腹水接种过 Walker256 大鼠腹水癌细胞的幼年雌性 SD 大鼠 7-14d 后会出现明腹水症状。将 Walker256 腹水鼠用灌胃姿势固定好（左手固定），头朝上，75%酒精毒整个腹部，右手拿 10ml 注射器针管加 1ml 注射器针头，在幼鼠腹腔最低位刺入（腹部中线旁刺入，勿扎到心脏），抽取腹水并比较，留有棕黄的粘稠腹瘤细胞待用，弃用血性腹水。将收集到的腹水瘤细胞 1200rpm、离心 8min，弃清，沉淀物在超净台上用 10ml、0.01M PBS 悬浮后再 1200rpm、离心 8min，弃清，然后用 PBS 重悬腹水瘤细胞，使浓度为 5×106个细胞/ml，置于冰上待用

（C） （D） 2 胫骨钻孔后，轻微弯曲的 2mL 注射器针头探测骨髓腔（图 A、B）；胫骨上的穿刺孔（图 C）；微量注射器将癌细胞注入胫骨骨髓腔内（图 D）。.7 干预方法及分组.7.1 CONT 组:不做任何处理；.7.2 Sham 组:右后肢胫骨骨髓腔内注射 10ul PBS 液，第 5 天开始定时腹腔 1ml 生理盐水，一天两次；.7.3 BCP 组：右后肢胫骨骨髓腔内注射 10ul 癌细胞 PBS 混悬液，第 5 天开时腹腔注射 1ml 生理盐水，一天两次；.7.4 AMI1.5 组：右后肢胫骨骨髓腔内注射 10ul 癌细胞 PBS 混悬液，第 5 天定时腹腔注射 1.5mg/kg AMI，一天两次；.7.5 AMI3 组：右后肢胫骨骨髓腔内注射 10ul 癌细胞 PBS 混悬液，第 5 天开

骨 X 线检测结果（如图 3）：正常大鼠骨小梁完整，骨皮质连续；第 7d，术侧胫骨少量骨小梁缺失，骨皮质完整；注射癌细胞后第骨皮质不连续，周围组织轻微肿胀；注射癌细胞后第 21d，术侧胫续，出现病理性骨折，周围组织明显肿胀。结果

【参考文献】

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本文编号：2751747