叶酸介导靶向肿瘤细胞的白芨多糖聚合物胶束给药系统的研究

发布时间：2020-07-17 03:15

【摘要】：课题组前期制备了具有pH敏感性的硬脂酸白芨多糖共聚物(BSPs-SA),经过研究发现其对多西他赛(DTX)具有缓释、增溶的作用,除此之外还能增加药物在肿瘤部位的浓集,从而提高药物的抗肿瘤效果。本研究在课题组前期研究基础上,对BSPs-SA的制备条件进一步优化,考察了硬脂酸用量、催化剂用量及反应温度对硬脂酸取代度的影响,筛选出最佳合成条件。为了进一步增加主动靶向性,将叶酸(FA)分子接枝到了BSPs-SA上,通过改变叶酸的用量制备了不同取代度的叶酸修饰的硬脂酸白芨多糖共聚物(FA-BSPs-SA),采用氢核磁光谱法(~1H-NMR)、紫外可见分光光度法(UV-vis)及红外光谱法(FT-IR)对其进行了结构确证。以荧光光谱法测定了FA-BSPs-SA共聚物的临界聚集浓度(CAC)。以DTX为模型药物,通过乳化-溶剂挥发法制备了载药胶束(DTX/FA-BSPs-SA),采用动态光散射仪对其粒径、粒度分布及zeta电位进行了测定。采用高效液相法(HPLC)测定了胶束的载药量及包封率。采用透析法对其体外释药行为进行了研究。通过红细胞溶血实验对FA-BSPs-SA共聚物进行了初步安全性评价,并采用MTT法测定了FA-BSPs-SA共聚物材料及其载药胶束的细胞毒性,。结果表明,合成BSPs-SA的优化条件为:当BSPs用量为400 mg时,SA用量为0.45 mmol,催化剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)及4-二甲氨基吡啶(DMAP)用量为n_(SA):n _(DMAP):n_(EDC)=1:1:1.2,反应温度为38℃,得到BSPs-SA共聚物的最佳硬脂酸取代度为11.93%。~1H-NMR、UV-vis和FT-IR结果均证实叶酸成功接枝在BSPs-SA上,当叶酸用量为0.05 mmol、0.1 mmol和0.2 mmol时,聚合物的叶酸取代度分别为1.12%、2.4%、5.6%。随着叶酸取代度的增加,CAC逐渐减小。将疏水性药物DTX包埋在FA-BSPs-SA胶束中后,叶酸取代度增加,胶束粒径减小,载药量与包封率均增加。载药胶束体外释放实验表明,其释药具有pH依赖性,酸性介质中释放更快。DTX/FA-BSPs-SA胶束在pH 5.0和pH 7.4条件下48 h的累积释药百分率分别为(61.12±0.53)%和(67.90±0.06)%;溶血性实验表明,FA-BSPs-SA共聚物在0.1-0.5 mg/mL范围内溶血率均小于5%,MTT结果显示,共聚物FA-BSPs-SA和BSPs-SA浓度为40μg/mL时,细胞存活率均仍在80%以上,结果表明其具有较好的生物相容性。与DTX溶液相比,相同药物浓度的DTX/FA-BSPs-SA和DTX/BSPs-SA胶束抗肿瘤效果更佳,且DTX/FA-BSPs-SA对有叶酸受体表达的肿瘤细胞的抑制作用较DTX/BSPs-SA胶束更强。综上所述,FA-BSPs-SA有望作为难溶性抗肿瘤药物的纳米载体材料。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R943
【图文】：

示意图,共聚物胶束,细胞内,示意图

图 1.2 FA-BSPs-SA 共聚物胶束的制备、载药及细胞内释放示意图Fig. 1.2 Schematic illustration of preparation, drug loading and intracellarrelease of DTX/FA-BSPs-SA copolymer micelles

路线图,白芨,叶酸,多糖

第 2 章叶酸修饰白芨多糖两亲性共聚物的制备与表征Da）内，以 Na2CO3-NaHCO3（pH 10）缓冲液为介质进行透析，过程中定时测定透析介质于 283 nm 处的紫外吸收，当吸光度接近 0 时，将透析介质更换为蒸馏水继续透析 2 天，将透析袋内液体冻干，即得黄棕色 FA-BSPs-SA 纯化粉末，以上过程均为避光条件下进行。[87]。合成 FA-BSPs-SA 的流程如图 2.1 所示。

硬脂酸,白芨,多糖,氢谱

第 2 章叶酸修饰白芨多糖两亲性共聚物的制备与表征16不同硬脂酸用量下制备的BSPs-SA的核磁氢谱见图2.2，其中 0.85和 0.25处的峰分别为硬脂酸中（-CH3）和（-CH2-）的特征质子峰；峰 4.55 和 5.4 分别代表白芨多糖上 1，6 位的连接氢与 1，4 位的连接氢。当硬脂酸用量增加时，硬脂酸的特征峰变强。由表2.4可知，当硬脂酸用量从0.35 mmol增加至0.45 mmol时，共聚物中硬脂酸取代度从 4.98%增加至 11.93%，可能是由于硬脂酸增多，可接枝于多糖羟基的羧基位点增多

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