抗蓖麻毒素药物的筛选与评价

发布时间：2020-07-20 12:34

【摘要】：蓖麻毒素(ricin)是从蓖麻籽中提取的一种植物糖蛋白,属于RIPs家族,由两条通过二硫键连接的多糖肽链RTA与RTB构成。Ricin具有毒性强、化学性质稳定、易获取等特点,严重威胁公众生命安全。Ricin可以快速抑制蛋白质合成,在数小时内即可造成细胞和组织损伤,却无明显的中毒症状,而目前缺乏特异性对抗药物,因此其中毒救治非常困难。目前,对于ricin中毒患者临床上多采用催吐、透析等对症支持疗法,但对大剂量中毒或未及时送医患者疗效不佳。研究目的:Ricin抗毒药物筛选及抗毒活性评价。研究内容:⑴在细胞及动物水平筛选和评价单克隆抗体、Rivax疫苗等大分子抗ricin药物的抗毒效果;⑵在细胞及动物水平筛选和评价小分子抗ricin药物的抗毒效果,并采用联合用药的方式评价抗ricin药物的抗毒效果。研究方法:⑴杂交瘤技术制备单克隆抗体,ELISA法检测抗体亚类以及抗体与ricin结合特点,无细胞系蛋白合成抑制实验评价抗体对ricin抑制蛋白合成作用的影响,通过细胞实验与动物实验评价抗体的抗毒活性;⑵采用动物实验评价Rivax配伍铝佐剂和多糖佐剂免疫小鼠后对高剂量ricin中毒的抗毒效果;⑶CCK-8法评价小分子抑制剂与ricin处理后MDCK细胞的存活率,对小分子抑制剂的抗毒活性进行体外评价;研究小分子抑制剂和ricin处理后的小鼠存活率,对小分子抑制剂抗毒活性进行体内评价。研究结果:⑴成功制备了五株单克隆抗体(13-4,13-2-4,8-1-1-8,AB6与S11)。除13-4外,其他单克隆抗体均通过识别ricin不同表位与其结合,其中8-1-1-8与13-2-4识别RTB链,S11识别RTA;无细胞系蛋白合成实验表明单克隆抗体S11可抑制ricin诱导的蛋白合成抑制作用;细胞实验显示单克隆抗体AB6与S11可有效对抗ricin细胞毒性,EC_(50)分别为26.79 ng×mL~(-1)与11.19 ng×mL~(-1);动物实验显示AB6与S11可以对抗2倍致死剂量ricin毒性。⑵铝佐剂与茯苓多糖佐剂PCP-I配伍Rivax免疫小鼠可对抗9倍致死剂量ricin,小鼠存活率分别为90.91%与50%;淫羊藿多糖佐剂G1a配伍Rivax免疫小鼠可对抗3倍致死剂量ricin,小鼠存活率为77.78%。⑶细胞实验结果表明,28个小分子抑制剂中,re705c与re706c在同时给药或预防给药时均可对抗ricin细胞毒性;re705c、re706c与ricin同时给药时,EC_(50)值分别为0.67±0.14μmol×L~(-1)与0.39±0.08μmol×L~(-1);预防给药时,EC_(50)值分别为17.53±1.37 nmol×L~(-1)与0.44±0.08μmol×L~(-1);动物实验表明,中毒前0.5 h给予50 mg×Kg~(-1)的re705c可延长小鼠存活时间。AB6或S11与re705c联合用药可对抗2.5倍致死剂量ricin毒性,AB6或S11单独用药时,小鼠存活率分别为30%和60%;联用re705c后,小鼠存活率分别为90%与100%。结论:⑴单克隆抗体AB6与S11可对抗致死剂量的ricin中毒,可作为抗ricin候选药物进行下一步研究。⑵铝佐剂与PCP-I多糖佐剂配伍Rivax免疫小鼠可对抗9倍致死剂量的ricin中毒,可作为Rivax抗原的候选疫苗佐剂使用。⑶Re705c可提高中毒细胞的存活率,延长中毒小鼠存活时间,与单克隆抗体AB6联合用药可提高单克隆抗体的抗毒效果。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R965
【图文】：

条纹,蓖麻籽,蓖麻,植物

前言uscommunis）（图 1 左），又名蓖麻仁、大麻子、，在我国各地均有栽培。其种子蓖麻籽（图 1表面有光泽，伴有黑白棕色条纹。具有“绿色石经济价值。蓖麻叶或蓖麻籽是一种传统中药，具，可用于各种肿痛。蓖麻籽是工业用油蓖麻油的后，含有丰富的蛋白质，是一种优良的绿色饲料求低，可以在盐碱地沙地等贫瘠土地中生长，用我国的蓖麻种植面积约为 27 万公顷，蓖麻籽的世界第二1。

单因素方差分析,包被

测 S11 与 ricin 结合特点，mean ± SD, n = 3；与 BSA 包被组相比较05；单因素方差分析，SNK 后检验。racter of S11 with ricin by ELISA, mean ± SD, n = 3; compare with BS.01,*P < 0.05; one-wayANOVAtest followed by SNK test.

单因素方差分析,包被

检测 S11 与 ricin 结合特点，mean ± SD, n = 3；与 BSA 包被组相比较， 0.05；单因素方差分析，SNK 后检验。 character of S11 with ricin by ELISA, mean ± SD, n = 3; compare with BSA < 0.01,*P < 0.05; one-wayANOVAtest followed by SNK test.

【相似文献】