硫连接唾液酸缀合物的合成及抗流感活性研究

发布时间：2020-07-23 04:23

【摘要】：本课题利用唾液酸是流感病毒的天然受体这一重要因素,合成出高效的流感病毒抑制剂。以唾液酸为起始原料,首先在唾液酸4位引入氨基和胍基加强与流感病毒的结合。再在唾液酸2位引入硫苷以抵抗流感病毒水解糖苷键,构建出两种新型硫连接唾液酸小分子。选用硫连接唾液酸小分子为母体进行多价改造。以易获取、无毒、无免疫原性的人血清白蛋白(HSA)为骨架合成含有三键蛋白缀合物配体(BCN-HSA),通过无铜催化“Click”反应构建出两种硫苷唾液酸蛋白缀合物。使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行表征。选用高聚马来酸酐为骨架构建出两种硫苷唾液酸高聚马来酸酐缀合物,使用体积排阻色谱法对其进行表征。选用三株不同亚型的流感病毒[A/HuNan/SWL1331/2014(H1N1),A/Huairou,Beijing/1 1069/2014(H3N2),A/Chicken/Beijing/AT609/2014(H9N2)]作为NA的来源,进行酶水平的神经氨酸酶抑制实验。实验结果表明在酶水平缀合度更高的的马来酸酐缀合物的活性高于蛋白缀合物与硫苷唾液酸单体。细胞水平实验表明马来酸酐缀合物具有很好的抗病毒活性。细胞毒性实验显示化合物浓度在100 μM时只具有微弱的细胞毒性。本课题合成的硫苷唾液酸多聚马来酸酐缀合物是一种有效的流感病毒抑制剂,具有极大的研究前景,可用于今后流感病毒药物的研究与开发。
【学位授予单位】：天津科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R914;R96
【图文】：

神经氨酸酶,血凝素,流感病毒

同时具有Ｍ２离子通道。Ａ型流感病毒的ＨＡ分为１８个亚型（Ｈ１－Ｈ１８）邋，ＮＡ分为１１逡逑个亚型（Ｎ１－Ｎ１１）这种分类是根据两种蛋白的差异进行划分…丨。人源的ＨＡ识别唾液逡逑酸《－２－６半乳糖（图１－１Ｆ），禽源的ＨＡ主要识别唾液酸ａ－２－３半乳糖（图１－１Ｈ），猪逡逑上下呼吸道表面分别富含ａ－２－６和ａ－２－３连接的寡糖，因此流感以猪为中间宿主在人逡逑和禽类之间传播１１６＇邋１７＾ＮＡ是一种丨１型膜蛋白，它是由相同亚基组成的四聚体（图１—２）。逡逑大约有５０－１００个拷贝。ＮＡ是…种糖苷外切酶，它能够特异性识别流感病毒表面的唾逡逑液酸，从ａ－糖苻键上切除唾液酸残基，因此ＮＡ在流感病毒的聚集、促进流感病毒释逡逑放以及病毒颗粒在呼吸道粘液中迁移的过程中发挥着至关重要的作用叩－２0１。ＨＡ同样逡逑是流感病毒表面一种重要的蛋白，它是一种同源三聚体，约有３００个拷贝，由ＨＡ１逡逑和ＨＡ２两种亚基组成，其中ＨＡ１为唾液酸结合域，ＨＡ２为膜融合域［２１１。在人感染流逡逑感后，流感病毒入侵宿主细胞，ＨＡ可以特异性识别宿主细胞表面的唾液酸残基，从逡逑而流感病毒完成黏附并入侵宿主细胞［２２』１。逡逑ＮＡ三聚体逦ＨＡ四聚体逡逑图１－２血凝素与神经氨酸酶结构逡逑Ｆｉｇ．邋１邋－２１邋Ｉｃｉｎａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ邋ａｎｄＮｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ逡逑流感病毒的基质蛋白是由Ｍｌ和Ｍ２组成的非糖基化的结构蛋白ＰＩ

流感病毒,侵染,周期,唾液酸

原理图,簇效应,原理,多价

试着从以下的四个方面来解释糖簇效应的产生：１）螯合效应，多价配体与多价受体进逡逑行１：１的完全配合；２）受体簇集效应，多价配体可以诱导受体在细胞表面的簇集；３）逡逑亚位点结合效应，多价配体可以与受体的主、亚位点结合；４）统计效应（图１－７）。逡逑１、螯合效应逦２、受体簇集效应逡逑又Ａ—足逡逑３、亚位点结合效应逦４、统计效应逡逑图１－７糖簇效应原理逡逑Ｆｉｇ．邋１－７邋Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ邋ｏｆｃｌｕｓｔｅｒ邋ｅｆｆｅｃｔ逡逑目前，对于糖类药物分子的结构修饰，除了对其结构进行改造提高与流感病毒的逡逑结合来提高活性外，利用多价效应提高分子的活性是迄今为止对糖类药物最成功的改逡逑造［７５１。流感病毒表面ＮＡ与其天然配体唾液酸的结合力很低，但流感病毒表面的ＮＡ逡逑是以类似蘑菇状的四聚体的形式存在，且每个流感病毒表面大约有５０－１００个拷贝［７６１，逡逑因此流感病毒的表面存在大量的结合位点。受到多价效应的启发，在一个骨架上铆定逡逑多个具有抗流感活性的小分子，就能够与同一病毒颗粒上的多个ＮＡ活性位点或者同逡逑一个ＮＡ的多个亚基同时结合，占据流感病毒表面的ＮＡ活性位点，抑制ＮＡ的水解逡逑９逡逑

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