叶酸偶联芦荟壳聚糖纳米粒的制备及其抗肿瘤靶向活性的初步研究

发布时间：2020-07-24 10:15

【摘要】：目的 恶性肿瘤是当今威胁人类健康的第一杀手，我国的癌症发病率一直处于上升趋势，肿瘤的治疗是当今学者所研究的热点之一。本文以具有抗肿瘤活性的芦荟多糖为主药、以天然无毒可降解的壳聚糖为载体、以叶酸作为配体采用离子交联法制备芦荟壳聚糖纳米粒。并利用响应面法优化芦荟壳聚糖纳米粒的制备工艺，同时考察芦荟壳聚糖纳米粒的表征和体外释药性能；修饰纳米粒表面，在纳米粒表面连接叶酸，使其具有靶向性，并用红外吸收光谱检测连接情况。通过使纳米粒包载荧光染料异硫氰酸荧光素（FITC）来考察肿瘤细胞SMMC-7721对纳米粒的摄取性能，证明偶联叶酸的纳米粒具有靶向性，因此摄取性能优于普通非偶联叶酸的纳米粒。通过MTT法考察空白纳米粒对肿瘤细胞SMMC-7721的毒性，证明纳米粒的辅料无毒性；比较芦荟壳聚糖纳米粒、叶酸偶联芦荟壳聚糖纳米粒及芦荟原药在体外对肿瘤细胞SMMC-7721的活力抑制作用，证明芦荟壳聚糖纳米粒、叶酸偶联芦荟壳聚糖纳米粒与芦荟原药同样具有抗肿瘤效应，同时证明了叶酸偶联芦荟壳聚糖纳米粒因其具有的靶向性，优于普通的芦荟壳聚糖纳米粒与芦荟原药。通过吖啶橙（AO）染色法，更加直观的来说明空白偶联叶酸壳聚糖纳米粒载体的安全性、无毒性；包载芦荟多糖的叶酸偶联壳聚糖纳米粒对肿瘤细胞SMMC-7721增殖有明显的抑制作用。 方法 采用离子交联法来制备芦荟壳聚糖纳米粒。以药物量与壳聚糖量比例、pH、搅拌速度作为考察因素，以纳米粒的包封率为评价指标；采用响应面法研究响应值以及最佳变量的组合，筛选最佳处方工艺；并对芦荟壳聚糖纳米粒进行体外释放研究。利用EDC与NHS来连接叶酸与纳米粒并通过红外来检测叶酸与纳米粒的连接情况。通过MTT实验考察空白纳米粒对细胞活力的影响并证明辅料的无毒性，比较芦荟原药、芦荟壳聚糖纳米粒、叶酸偶联壳聚糖纳米粒三者对肿瘤细胞SMMC-7721的活力抑制作用。将纳米粒包载荧光染料异硫氰酸荧光素（FITC），考察肿瘤细胞SMMC-7721对普通纳米粒及偶联叶酸纳米粒的摄取情况。通过吖啶橙（AO）染色法，考察空白偶联叶酸壳聚糖纳米粒载体与包载芦荟的叶酸偶联壳聚糖纳米粒对肿瘤细胞增殖的影响。 结果 采用离子交联法制备芦荟壳聚糖纳米粒大小较均一，结构完整，为球形或类球形。芦荟壳聚糖纳米粒的制备采用响应面法设计并优化后的处方工艺为：药物量与壳聚糖量比例为0.14、pH为3.0、搅拌速度294r/min。以此条件制得的纳米粒包封率与预测值偏差较小。芦荟壳聚糖纳米粒具有缓释特性，体外释放过程符合Ritger-Peppas模型。通过红外吸收光谱检测到叶酸与纳米粒以连接偶合。MTT实验结果表明芦荟壳聚糖纳米粒及叶酸偶联芦荟壳聚糖对肿瘤细胞SMMC-7721有明显的抑制作用，空白纳米粒对细胞几乎无抑制作用。细胞对纳米粒的摄取效果明显，特别是偶联叶酸的芦荟壳聚糖纳米粒更为突出。吖啶橙实验的结果是空白的叶酸偶联壳聚糖对肿瘤细胞的增殖无影响，包载芦荟的叶酸偶联壳聚糖纳米粒对细胞的增殖有明显的抑制作用。 结论 采用离子交联法制备芦荟壳聚糖纳米粒，并利用响应面法设计并优化是可行的，纳米粒具有明显的缓释特性，纳米粒在肿瘤细胞中摄取良好，其中偶联叶酸的纳米粒的摄取更加明显具有靶向性，对肿瘤细胞具有明显抑制作用，辅料无毒性，具有很大的研究前景。
【学位授予单位】：辽宁医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R944.9
【图文】：

荟多糖制成新的剂型可以更好的发挥芦荟多糖的抗肿瘤活性。纳米粒是尺寸小于 1000 nm 的纳米粒子。一般由天然高分子材料通过化学材料交联构成，作为新型药物传递系统纳米粒是目前研究的热点。纳米粒由于其特殊的性质已广泛应用于抗肿瘤药物的传递。一是因为肿瘤的血管壁间隙约为 100 nm，对尺寸小于 100 nm 的粒子具有生物通透性，因此包含抗肿瘤药物的纳米粒可以从内皮组织血管中逸出进入肿瘤内部而发挥疗效[10]。二由于纳米粒的尺寸很小可以被肿瘤细胞通过吞噬作用而摄取，从而有效避免了细胞膜对药物转运的限制。三是恶性肿瘤细胞膜的通透性增加，纳米粒还可大大延长作用时间。四是将抗肿瘤药物包裹于纳米粒之中还避免了药物与肿瘤细胞外耐药蛋白的结合还有效抑制了肿瘤细胞的耐药性。壳聚糖是自然界中唯一存在的碱性多糖，是甲壳素脱乙酰后的产物，广泛存在于自然界中其表面有氨基带正电具有极性强、易结晶等特点[11]。壳聚糖的结构如下图所示

壳聚糖释放率测定量适量采用优化处方制备的冷冻干燥芦荟壳聚糖析袋中，紧密封口，放入锥形瓶中。向锥形瓶中加 7.4），采用恒温振荡水浴法，温度为 37±0.5 ℃，以释放。分别于 0.5，1，2，4，6，9，12，18，2线方法计算多糖量，并每次补充 10 mL 新鲜磷酸盐结 果外观形态及粒径持膜的铜网上滴加 1~2 滴芦荟壳聚糖纳米粒，自然00EX 透射电子显微镜观察载药纳米粒的形态，见壳聚糖纳米粒大小较均一，结构完整，为球形或类

检测波长的确立多糖可与浓硫酸发生作用，水解成单糖，并与苯酚进一步发，在一定紫外波长下具有特定吸收峰[26]。实验以无水葡萄糖苯酚-硫酸法测定芦荟中芦荟多糖的含量。分别将葡萄糖水释至一定浓度后，滴加 5%苯酚试液，振摇 1 min，迅速加in，在 400~600 nm 波长内进行扫描。扫描结果如图 4 所 处有最大吸收，而除芦荟外的其他辅料在此波长下则不吸测波长的选择及标准曲线绘制

【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 王祥珍;李英勇;孙显斌;;芦荟治疗对子宫内膜癌survivin表达的影响[J];广东医学院学报;2006年04期

本文编号：2768697