RIB通过PRMT5抑制胃癌生长的作用及机制研究

发布时间：2020-07-27 12:12

【摘要】：目的:研究RIB通过PRMT5介导精氨酸甲基化修饰抑制胃癌生长的表观遗传调控机制。方法:用MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]比色法考察RIB对MFC、SGC-7901细胞生长的作用;采用平板克隆形成实验检测RIB对MFC、SGC-7901细胞集落形成的影响;用流式细胞仪检测RIB对MFC、SGC-7901细胞周期与凋亡的影响;用Western blot检测相关蛋白表达,研究其体外的抗肿瘤作用机制;用MTT法考察RIB与化疗药物联用对胃癌细胞的作用,并研究体外联用的抗肿瘤作用机制。结果:1.RIB对小鼠胃癌细胞MFC和人胃癌细胞SGC-7901的增殖具有抑制作用,并具有时间-浓度依赖性。RIB作用MFC细胞48 h、72 h、96 h后其IC50值分别为13.70±1.52?g/mL、10.97±0.59?g/mL、5.73±0.21?g/mL。RIB治疗SGC-7901细胞48 h、72 h、96 h后其IC50值分别为34.93±1.44?g/mL、28.56±1.79?g/mL、24.73±1.69?g/mL。2.平板克隆形成实验结果显示,RIB能够抑制MFC、SGC-7901细胞集落形成。3.流式细胞仪检测RIB对MFC、SGC-7901细胞凋亡的影响,结果显示,RIB不能诱导MFC,SGC-7901细胞凋亡。4.流式细胞仪检测RIB对MFC、SGC-7901细胞周期各时期的影响,结果发现,RIB使MFC、SGC-7901细胞在G0/G1期数目减少,S期增加,因此RIB将MFC、SGC-7901细胞阻滞在S期,抑制DNA的复制,从而抑制细胞增殖。5.Western blot结果显示,RIB处理MFC、SGC-7901细胞后,PRMT5和eIF4E蛋白低表达,即RIB可能通过下调PRMT5,eIF4E的表达从而抑制胃癌细胞的生长。6.25μg/mL的RIB与10?20μg/mL的氟尿嘧啶(5-FU)联用后,对抑制MFC细胞增殖有相加作用,但对抑制SGC-7901细胞增殖具有拮抗作用;25μg/mL的RIB与0.0625~0.125μg/mL的阿霉素(Adriamycin或Doxorubicin,ADM或DOX)联用后,对抑制MFC、SGC-7901细胞增殖有相加作用;25μg/mL的RIB与浓度为0.0625?0.125μg/mL的顺铂(Cisplatin,DDP)联用后,对抑制MFC细胞增殖具有相加作用,与0.0625?0.5μg/mL的顺铂联用后对抑制SGC-7901细胞具有相加作用。结论:1.RIB对MFC、SGC-7901细胞的增殖具有时间-浓度依赖性的抑制作用。2.RIB能够抑制MFC、SGC-7901细胞集落形成。3.RIB不能够诱导MFC、SGC-7901细胞凋亡。4.RIB能够将MFC、SGC-7901细胞阻滞在S期,阻滞DNA的复制,从而抑制细胞增殖。5.RIB可能通过下调PRMT5,eIF4E蛋白的表达,达到抗胃癌细胞生长的作用。6.25μg/mL的RIB与5-FU(10?20μg/mL)联用后,对抑制MFC细胞增殖具有相加作用,但对抑制SGC-7901细胞增殖具有拮抗效应;RIB与阿霉素(≤0.125μg/mL)或顺铂联用后,对抑制MFC、SGC-7901细胞增殖具有相加作用。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R96
【图文】：

硕士学位论文 RIB 通过 PRMT5 抑制胃癌生长的作用第三章 实验结果TT 细胞增殖抑制实验IB 对 MFC 细胞增殖的抑制作用过 MTT 法检测 RIB 对 MFC 细胞增殖的抑制作用如图 1-1 所示，与比，RIB 各个浓度治疗组其细胞增殖率明显降低，P < 0.001，具有与此同时，RIB 浓度越高，细胞增殖率越低，P < 0.01，各浓度间差异 表明 RIB 能够明显抑制 MFC 细胞的增殖，且具有浓度依赖示，MFC 细胞经 RIB 作用 48 h 72 h 96 h后其 IC50 值分别为 1310.97±0.59 g/mL 5.73±0.21 g/mL。

1-2 RIB对 SGC-7901 细胞增殖的影响（48 h 72 h 和 96 h, x s，n=32 Effects of RIBon proliferation of SGC-7901 cells ( 48 h, 72 h and 96 h, x 与阴性对照组比较，* P 0.05，** P < 0.01，*** P < 0.001（双侧 t 检验表 1 RIB处理 MFC 及 SGC-7901 细胞不同时间段 IC50 值( x s) IC50 of MFC and SGC-7901 cells treated with RIB at different time points (Cell linesIC50 of RIB (μg/mL)48 h 72 h 96 hMFC 13.70±1.52 10.97±0.59 5.73±0.21SGC-7901 34.93±1.44 28.56±1.79 24.73±1.6B 对胃癌细胞集落形成能力的影响

兰州大学硕士学位论文 RIB 通过 PRMT5 抑制胃癌生长的作用及机制研究μg/mL 范围内具有量效关系，表现出一定的浓度依赖性 SGC-7901 细胞阴性对照组，RIB 3.125 μg/mL 组，6.25 μg/mL 组，12.5 μg/mL 组所对应克隆形成率分别为 84.667%±4.163%，78.667%±1.333%，76.667%±2.000%，54.333%±2.517%，与阴性对照组相比，给药后的集落形成减少，但低浓度组与阴性对照组相比没有显著性差异，中浓度组与对照组相比，P < 0.05，具有显著性差异，高浓度组与对照组相比，P < 0.001，极具有显著性差异 3.125 μg/mL 组与 6.25 μg/mL 组相比，集落形成减少，但差异没有显著性，6.25 μg/mL 与 12.5 μg/mL 组相比，集落形成减少，且 P < 0.001,差异极具有显著性 3.125 μg/mL 组与 12.5 μg/mL 组相比，集落形成减少，P < 0.001，差异极具有显著性，因此，RIB能够抑制SGC-7901细胞克隆形成，且在 3.125 μg/mL 6.25 μg/mL 组范围内具有量效关系，表现出一定的浓度依赖性

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本文编号：2771835