SLL-1A-16在肺癌细胞中抗肿瘤活性及其作用机制研究
发布时间：2020-07-29 12:53
【摘要】：肺癌是一种异质性,复杂性且具有挑战性的疾病,是目前世界上发病率和死亡率均居首位的癌症。随着世界各地的工业化,城市化和环境污染,肺癌的病因变得更加复杂。肺癌分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌,其中非小细胞肺癌占据80-85%。肺癌的治疗手段包括手术及放化疗,但现有化疗药物少,对患者产生不可逆损伤,因此亟待开发疗效高,毒副作用小的新型抗肺癌药物。烟酸硒氰化合物SLL-1A-16是全新的有机硒小分子化合物,是将硒氰基团引入烟酸中合成而来,本研究首先探究了化合物SLL-1A-16抑制多种肿瘤细胞增殖的作用,发现SLL-1A-16对肺癌细胞的抑制作用最显著,因此选取其中肺癌为主要研究对象探究SLL-1A-16在肺癌中的抗肿瘤活性及机制。首先,利用MTT法检测化合物SLL-1A-16对肺癌细胞A549、NCI-H460,胃癌细胞BGC-823、MKN-28,肝癌细胞HEPG2、HEP3B,乳腺癌细胞MBA-MD-823、MCF7,前列腺癌细胞 LNCAP、PC-3,结直肠癌细胞 Caco2、SW480细胞增殖的影响,发现SLL-1A-16抑制肺癌细胞增殖的效果最显著。然后,进一步研究化合物SLL-1A-16处理两种肺癌细胞24小时后,细胞周期和细胞凋亡的变化,Western Blot检测肺癌发生相关蛋白表达水平的变化;利用计算机模拟分子对接的方法模拟化合物SLL-1A-16的可能靶点,初步探究其抑制肺癌细胞增殖的分子机制。结果如下:1.MTT法检测细胞活力,SLL-1A-16分别处理6种癌系的12种细胞,发现化合物SLL-1A-16显著抑制肺癌细胞增殖,CCK8法检测SLL-1A-16对肺癌细胞A549和NCI-H460的IC50值分别为20.935μM、11.624μM,克隆形成实验表明SLL-1A-16能够显著抑制肺癌细胞克隆形成能力。2.化合物SLL-1A-16将A549细胞阻滞在G1期,降低G1期相关蛋白Cyclin D和CDK4的蛋白表达,对NCI-H460细胞没有显著的细胞阻滞作用,但能降低G1期相关蛋白Cyclin D的表达。3.化合物SLL-1A-16显著诱导细胞凋亡,且随处理浓度增大,凋亡情况越显著;在两种肺癌细胞A549和NCI-H460中促进凋亡相关蛋白Bax表达增加,抑制凋亡蛋白BCL2表达降低同时凋亡效应蛋白activecaspase3表达升高。4.化合物SLL-1A-16上调两种肺癌细胞中抑癌因子DKK3和磷酸化JNK、下调磷酸化STAT3蛋白表达,抑制mTOR信号通路的激活从而发挥抑制肺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用。5.计算机分子对接发现,化合物SLL-1A-16与mTOR蛋白存在相互作用,且存在9中可能构象,在可能的9种构象中化合物均结合在mTOR蛋白的FAT或激酶结构域,表明SLL-1A-16能够靶向mTOR信号通路,抑制其激活。上述结果表明,化合物SLL-1A-16能够通过上调抑癌因子DKK3,下调p-STAT蛋白表达,同时激活MAPK信号通路抑制mTOR相关信号通路的激活在肺癌细胞中发挥抑制细胞增殖的作用。化合物SLL-1A-16在未来可能作为一种新的小分子药物应用于肺癌的靶向治疗。
【学位授予单位】：辽宁大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R96
【图文】：
图１－２化合物ＳＬＬ－１Ａ－１６对ＨｅｐＧ２和Ｈｅｐ３－ｂ细胞增殖的抑制作用逡逑１．４．３化合物ＳＬＬ－１Ａ－１６对两种胃癌细胞的作用逡逑ＳＬＬ－１Ａ－１６处理胃癌细胞ＭＫＮ－２８和ＢＧＣ－８２３。以０．３％邋ＤＭＳＯ为对照组，逡逑实验组化合物浓度分别取３、１０、３０、１００、３０（ＨｉＭ，５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）和Ｓｕｌｉｎｄａｃ逡逑作为阳性对照组，在ＭＫＮ－２８细胞实验中５－ＦＵ浓度为３５＾Ｍ，Ｓｕｌｉｎｄａｃ浓度为逡逑２ｍＭ，在ＢＧＣ－８２３细胞实验中５－ＦＵ浓度为２５＾Ｍ，Ｓｕｌｉｎｄａｃ浓度为１．２ｍＭ，结逡逑果如图所示，ＳＬＬ－１Ａ－１６在药物处理浓度为１００、３００ｎＭ时能够显著抑制ＭＫＮ－２８逡逑细胞增殖，在ＢＧＣ－８２３细胞中ＳＬＬ－１Ａ－１６不能抑制细胞增殖，相反能够促进逡逑ＢＧＣ－８２３细胞的增殖复制。逡逑ＭＫＮ－２８逦ＢＧＣ－８２３逡逑１５0１逦Ｅ３邋ＤＭＳＯ逦２５０￣｜逡逑＾逦ＥＳ３邋ＳＬＬ－１Ａ－１６－３逦Ｅ３邋ＭＳＯ逡逑邋１00邋Ａ邋工工逦□邋ＳＬＬ－１Ａ．１６－１０邋ＭＭ邋５邋２０°－逦＿逦Ｃ３邋ＳＬＬ－１Ａ－１６－３邋＾逡逑ＱＤ邋ＳＬＬ－ＩＡ－１６－３０＾逦＇他逦＾邋＾邋％逦□邋ＳＬＬ－１Ａ－１６－１０邋＾逡逑｜逦■`幔藉巍
本文编号：2773988
【学位授予单位】：辽宁大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R96
【图文】：
图１－２化合物ＳＬＬ－１Ａ－１６对ＨｅｐＧ２和Ｈｅｐ３－ｂ细胞增殖的抑制作用逡逑１．４．３化合物ＳＬＬ－１Ａ－１６对两种胃癌细胞的作用逡逑ＳＬＬ－１Ａ－１６处理胃癌细胞ＭＫＮ－２８和ＢＧＣ－８２３。以０．３％邋ＤＭＳＯ为对照组，逡逑实验组化合物浓度分别取３、１０、３０、１００、３０（ＨｉＭ，５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）和Ｓｕｌｉｎｄａｃ逡逑作为阳性对照组，在ＭＫＮ－２８细胞实验中５－ＦＵ浓度为３５＾Ｍ，Ｓｕｌｉｎｄａｃ浓度为逡逑２ｍＭ，在ＢＧＣ－８２３细胞实验中５－ＦＵ浓度为２５＾Ｍ，Ｓｕｌｉｎｄａｃ浓度为１．２ｍＭ，结逡逑果如图所示，ＳＬＬ－１Ａ－１６在药物处理浓度为１００、３００ｎＭ时能够显著抑制ＭＫＮ－２８逡逑细胞增殖，在ＢＧＣ－８２３细胞中ＳＬＬ－１Ａ－１６不能抑制细胞增殖，相反能够促进逡逑ＢＧＣ－８２３细胞的增殖复制。逡逑ＭＫＮ－２８逦ＢＧＣ－８２３逡逑１５0１逦Ｅ３邋ＤＭＳＯ逦２５０￣｜逡逑＾逦ＥＳ３邋ＳＬＬ－１Ａ－１６－３逦Ｅ３邋ＭＳＯ逡逑邋１00邋Ａ邋工工逦□邋ＳＬＬ－１Ａ．１６－１０邋ＭＭ邋５邋２０°－逦＿逦Ｃ３邋ＳＬＬ－１Ａ－１６－３邋＾逡逑ＱＤ邋ＳＬＬ－ＩＡ－１６－３０＾逦＇他逦＾邋＾邋％逦□邋ＳＬＬ－１Ａ－１６－１０邋＾逡逑｜逦■`幔藉巍
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