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壳聚糖交联的果胶阿霉素肝癌靶向纳米传递体系的构建及其功能研究

发布时间:2020-07-30 07:39
【摘要】:制备并表征壳聚糖交联的果胶阿霉素肝癌靶向纳米传递体系(CS-PDC-M),并对其功能进行评价,具体内容如下:CS-PDC-M的制备和表征研究:采用课题组前期研究工作已得到大分子前药PDC偶合物(结构验证已完成),壳聚糖的分子中含有氨基(-NH2),果胶的分子中含有羧基(-COOH),通过正负电荷交联,最终得到目标产物CS-PDC-M,实现肝癌靶向传递。用扫描电镜观察CSPDC-M呈不规则的球形。马尔文Zeta-Sizer纳米粒度仪检测CS-PDCM的粒径为221.2 nm、具有均匀的粒径分布,Zeta电位为-14.6 m V,并且稳定性良好。紫外分光光度法表征载药量为55.6%,包封率为23.23%。采用动态扩散法,研究在三种不同p H模拟条件下CS-PDCM的体外释药率,结果表明CS-PDC-M具有一定缓释性。CS-PDC-M的体外生物相容性研究:选取人血红细胞为模型,采用溶血性试验检测DOX和CS-PDC-M的溶血率;选取牛血清白蛋白为模型,用Bradford法验检测阿霉素和CS-PDC-M纳米传递体系的BSA蛋白吸附率;选取人脐静脉内皮细胞和L02细胞为细胞模型,采用MTT法观察DOX和CS-PDC-M对人脐静脉内皮细胞和L02细胞的细胞存活率。结果表明与DOX相比,CS-PDC-M具有更好的细胞相容性和低毒性。CS-PDC-M的体外抗肿瘤作用研究:选取Hep G2人肝癌细胞,MCF-7人乳腺癌细胞以及A549人非小细胞肺癌细胞为细胞模型,采用MTT法观察DOX和CS-PDC-M对三种癌细胞的细胞存活率。结果表明与MCF-7细胞和A549细胞比较,CS-PDC-M对Hep G2细胞的细胞毒性更大。通过荧光拍照与流式细胞术运用竞争结合实验测定Hep G2细胞,MCF-7细胞以及A549细胞对DOX和CS-PDC-M的摄取情况,结果表明CS-PDC-M具有肝癌靶向性。通过荧光拍照与流式细胞术运用时间依赖实验测定Hep G2细胞为细胞DOX和CS-PDCM的细胞摄取情况,结果表明CS-PDC-M具有一定缓释性能。通过细胞黏附实验和细胞划痕实验,发现交联壳聚糖后,可以提高CSPDC-M对肿瘤细胞的黏附性,抑制肿瘤细胞迁移。CS-PDC-M的体内抗肿瘤作用研究:建立Hep G2肝癌荷瘤裸鼠模型,通过尾静脉注射给药,以裸鼠肿瘤体积变化,体重变化,最终瘤重及生存率为指标,并对肿瘤组织与心脏组织进行切片HE染色,考察CS-PDC-M对肿瘤的抑制作用。结果显示CS-PDC-M对裸鼠肿瘤具有较强的抑制作用,并且降低了DOX的心脏毒性。CS-PDC-M的体内器官损伤研究:选取SD大鼠为动物模型,尾静脉注射给药,通过大鼠眼眶静脉丛取血,用全自动生化仪检测ALT、AST、CK等血生化指标,考察CS-PDC-M的体内器官损伤情况。结果显示DOX组大鼠的ALT值与CK-MB值均高于空白组,而CSPDC-M组的各个参数大体上维持在正常水平,表明CS-PDC-M降低了DOX的毒性,不会对大鼠的肝脏、肾脏和心脏造成严重损害。
【学位授予单位】:南华大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R943
【图文】:

示意图,传递体系,纳米,示意图


图 1.1 CS-PDC-M 纳米传递体系的示意图Figure 1.1 Schematic illustration of CS-PDC-M.本课题通过将带正电荷的壳聚糖与带负电的PDC-M进行交联,成功制备CS-PDC-M 纳米传递体系。CS-PDC-M 纳米传递体系的制备与研究思路如图 1.1 所示,本课题的实验流程图 1.2 所示。用扫描电镜(FE-SEM)观察 CS-PDC-M 的形貌。采用马尔文纳米粒度仪表征 CS-PDC-M 的粒径大小、分布情况、Zeta 电位以及稳定性能。紫外分光光度法(UV)检测 CS-PDC-M 的载药量和包封率。采用动态扩散法,研究 CS-PDC-M 在三种不同 pH 环境下的体外释药性能。体外生物相容性试验:采用 MTT 法观察 DOX 和 CS-PDC-M 处理人脐静脉内皮细胞和 L02细胞 24h 后的细胞存活率;采用溶血性试验检测 DOX 和 CS-PDC-M 的溶血率;用 Bradford 法检测阿霉素和 CS-PDC-M 纳米传递体系的 BSA 蛋白吸附率。选取HepG2 细胞,MCF-7 细胞以及 A549 细胞为细胞模型,采用 MTT 法观察 DOX和 CS-PDC-M 处理三个癌细胞 48h 和 72h 后的细胞毒性作用。通过荧光拍照与

扫描电镜图


图 2.1 CS-PDC-M 的扫描电镜图Figure 2.1 SEM images of CS-PDC-M.-PDC-M 的粒径及 zeta 电位测定验采用马尔文纳米粒度仪检测 CS-PDC-M 的粒径大小,多分散位。图 2.2 为 CS-PDC-M 的粒径及其分布图。从图中可以 PDI 为 0.185,呈正态单峰分布,平均粒径为 220nm 左右,一致。如图 2.3 和表 2.1,CS-PDC-M 的平均粒径为 220nm,径 140.6nm 比较有所增大。CS-PDC-M 的 Zeta 电位为-14.1ma 电位-28.1mV 相比有所升高。这两者表明壳聚糖分子中含胶分子中含有的羧基(-COOH)成功的通过正负电荷交联后,粒径和表面电荷有所改变。

平均粒径,电位测定,马尔文,纳米粒


图 2.1 CS-PDC-M 的扫描电镜图Figure 2.1 SEM images of CS-PDC-M.DC-M 的粒径及 zeta 电位测定用马尔文纳米粒度仪检测 CS-PDC-M 的粒径大小,多。图 2.2 为 CS-PDC-M 的粒径及其分布图。从图中可DI 为 0.185,呈正态单峰分布,平均粒径为 220nm 左。如图 2.3 和表 2.1,CS-PDC-M 的平均粒径为 220n40.6nm 比较有所增大。CS-PDC-M 的 Zeta 电位为-14位-28.1mV 相比有所升高。这两者表明壳聚糖分子中子中含有的羧基(-COOH)成功的通过正负电荷交联径和表面电荷有所改变。

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本文编号:2775234

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