抗菌肽17BIPHE2对肺腺癌A549细胞抑制作用及机制的研究
发布时间:2020-08-21 00:25
【摘要】:目的研究抗菌肽17BIPHE2对人肺腺癌A549细胞的抑制作用,并探讨其作用机制。方法1.利用MTT法检测不同浓度17BIPHE2(0-40μmol2L~(-1))及阴性对照肽RL-10对肺腺癌A549细胞和肺上皮BEAS-2B细胞的细胞毒性;并确定其IC_(50);2.利用流式细胞术,Transwell实验分别检测17BIPHE2处理后对A549细胞周期,细胞侵袭、迁移能力的影响;3.利用流式细胞术检测不同浓度17BIPHE2处理后A549细胞凋亡率,TUNEL染色和透射电子显微镜观察细胞形态变化情况;4.利用流式细胞术检测抗菌肽17BIPHE2处理A549细胞后线粒体膜电位(△Ψm)、钙离子和活性氧(ROS)的变化情况;5.Western blot检测抗菌肽17BIPHE2作用A549细胞后,ERK、p-ERK、Bax和Bcl-2蛋白的表达变化情况;6.采用siERK转染A549细胞,并分析转染后细胞的凋亡率以及ERK、p-ERK、Bax和Bcl-2蛋白的表达情况;7.构建肺腺癌裸鼠移植瘤模型,观察不同剂量抗菌肽17BIPHE2对小鼠移植瘤的作用;TUNEL染色和免疫组织化学技术检测移植瘤内细胞凋亡情况和Ki67的表达。结果1.抗菌肽17BIPHE2可抑制A549增殖,其24h半数抑制浓度(IC_(50))为34.33μmol2L~(-1);抗菌肽17BIPHE2对正常肺上皮BEAS-2B细胞增殖无影响。2.经0、25、35μmol2L~(-1)抗菌肽17BIPHE2处理A549细胞24h,A549细胞周期被阻滞于S期(P0.05);迁移、侵袭能力被有效地抑制;3.经不同浓度抗菌肽17BIPHE2(0、25、35μmol2L~(-1))处理A549细胞24h,TUNEL染色可见细胞核固缩断裂呈块状,染色质致密深染。随着17BIPHE2浓度的升高,处理组细胞凋亡的比例明显提高(P0.05)。在透射电子显微镜下可见,对照组A549细胞,胞质内的细胞器结构清晰,有大量内质网、游离核糖体和线粒体,细胞核内染色质均匀分布,核仁结构清晰;而抗菌肽处理组A549细胞,胞质内空泡增多,细胞核皱缩,细胞器结构被破坏,线粒体嵴断裂、内质网肿胀变空。流式细胞术检测显示,处理组A549细胞凋亡率明显升高(P0.05)。4.不同浓度(0、25、35μmol·L~(-1))抗菌肽17BIPHE2处理A549细胞后,A549细胞线粒体膜电位(△Ψm)明显降低,细胞内Ca~(2+)、细胞内活性氧(ROS)明显升高(P0.05);5.不同浓度(0、25、35μmol·L~(-1))抗菌肽17BIPHE2处理A549细胞24 h后,western blot检测发现ERK、Bcl-2表达下调,p-ERK、Bax表达上调,Bax/Bcl-2的比值增大(P0.05)。6.siERK转染A549后,经0、35μmol·L~(-1)的17BIPHE2处理A549细胞24h,凋亡率明显下降;ERK、p-ERK、Bax表达下调,bcl-2表达上调,Bax/Bcl-2的比值减小(P0.05)。7.移植瘤内注射不同浓度抗菌肽17BIPHE2(0、10、20mg/kg),连续2周,隔日注射。17BIPHE2治疗组与未治疗组相比,瘤体积明显减小,瘤组织内癌细胞凋亡率明显升高,ki67的表达量下调。结论1.抗菌肽17BIPHE2可通过抑制肺腺癌A549细胞迁移和侵袭,阻滞A549细胞的细胞周期,促进A549细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。2.抗菌肽17BIPHE2可降低肺腺癌A549细胞内线粒体膜电位(△Ψm),使A549细胞内活性氧(ROS)、钙离子(Ca~(2+))升高,从而激活ERK,通过ERK调控凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达,诱导A549细胞凋亡。
【学位授予单位】:宁夏医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R96
本文编号:2798653
【学位授予单位】:宁夏医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R96
【参考文献】
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本文编号:2798653
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